细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]RAW264.7 为什么一传就死？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]RAW264.7 为什么一传就死？

zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
1

发表于 2012-5-7 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]RAW264.7 为什么一传就死？



我的RAW264.7近一个月来没法养活，不知为何？为求细胞种子的质量，我从别人那讨来一些长势不错的RAW264.7细胞养，可是一传代就不对了。细胞光镜下发黑，不再是亮亮圆圆的了，长出很多伪足，细胞核很明显。我仔细看，也没发现有细菌，不知是什么原因。换了培养瓶，培液，都不见好。郁闷啊！急着用呐？恳求有经验的同仁，给点建议，帮帮我这个将近崩溃的人吧！
顶部
pencil菲[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75646
精华 1
积分 410
帖子 476
信誉分 102
可用分 3191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
2

发表于 2012-5-7 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养 Raw264.7 最重要的就是 轻轻吹打。连续吹打不超过5次。

T/E 处理也不能过头，在显微镜下观察1/3移动就可以stop。

传代细胞数 控制在 1，000，000（10cm培养皿）。培养基为DMEM。 两天传代一次。

传代完毕，在显微镜下观察，2，3个细胞粘在一起，最好了。过度吹打导致细胞单个分离的话，那就有可能变成你说的细胞变形。
顶部
TAT[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74236
精华 0
积分 507
帖子 694
信誉分 100
可用分 4298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
3

发表于 2012-5-7 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
个人感觉是不是胰酶的问题，我也在养这种细胞，但长势很好，好的不得了，不几天就要传带。建议重新配下胰酶，ph调至7.5-8.0.或者买一瓶Hyclone的胰酶试试。
顶部
TAT[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74236
精华 0
积分 507
帖子 694
信誉分 100
可用分 4298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
4

发表于 2012-5-7 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
而且我用的是普通的干粉配置的1640培养液（含10﹪新生牛血清），也没用DMEM，有需要的话，可以送你一瓶，但运费自付呵呵
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
5

发表于 2012-5-7 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感谢各位帮助，奇怪的是我不用胰酶的，就是PBS冲冲，DMEM养，也没有吹打过头，有人说可能是衣原体或支原体污染了。因为肉眼看不见细菌。
顶部
铜雀[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76992
精华 0
积分 344
帖子 365
信誉分 101
可用分 2611
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
6

发表于 2012-5-7 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

衣原体或支原体污染, 只要程度不是很高，是不会影响正常实验过程的。

我们传代时 不是 1000rpm/3min 离心么。 将上清液吸除掉以后，注入新鲜培养基，已经足够将衣原体或支原体的污染程度降低到不影响实验结果的。

因为，只要我们的实验室环境，没有整套的空气回流除尘系统的话，我们在一般环境下的培养箱内培养的细胞，都会在一定程度上感染支原体/依原体。

不信，你把你手里的所有种类的细胞，各选一个样本处死，用支原体/依原体test marker 转一下，肯定都有污染的。

Raw264.7， 对动作要求 必须要轻轻处置。多练习几次，相信会养好的。
顶部
yapuyapu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76072
精华 3
积分 574
帖子 695
信誉分 106
可用分 4338
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
7

发表于 2012-5-7 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我晕！我也养Raw264.7啊，我的细胞长的太快了，几乎一天一代~~是不是应该传的时候少分点啊？
顶部
铜雀[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76992
精华 0
积分 344
帖子 365
信誉分 101
可用分 2611
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
8

发表于 2012-5-7 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我听说的 转代时的细胞数 一般都是在 〈 5x 105 ~ 1x106/ 1cm培养皿 〉之间。 不过，最好不要过三天。
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
9

发表于 2012-5-7 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

后来给我细胞的师姐说，她的细胞也出了状况，可能是细胞传代太久了。我们大概养了3年了。我用原来的培液养了别的细胞，都好好的。应该可以排除污染死亡。我想也许这也是个答案。不知细胞系养多久该弃用？
再次感谢大家的关心和帮助。
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
10

发表于 2012-5-7 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我前一阵也出现过这个问题，怀疑污染后，用大剂量抗生素养了，在抗生素环境下就能传代，不知道你是不是污染了,你的细胞系不是永生化的么
顶部
 11  1/2 12››