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先拿你的样品用其他流式机型测一下,也许结果会好很多哦。
如果你是用FACSCanto、FACSCalibur、LSRII等机型测出这样的图,只能说是样品制备的问题,但用FACSAria测的,就不能把问题单单归结到样品上了。
FACSAria是新机型,激光形状跟以往的仪器都不一样,光斑是狭长的9umx81 um,对大于9 um的细胞进行狭缝扫描(slit scan),分辨率高,能做到11荧光,13参数。但这样的激光几何形状的改进,也给这一机型带来了弊病,就是不适合DNA分析。因为,DNA含量分析要收集一个细胞的所有DNA信号(面积)。当细胞较大时,slit scan获得的DNA信号不完全,有一部分信号会丢失,而通常G2/M期的细胞最大,所以这个期的细胞信号丢失最多,以致于无法看到明显的G2/M峰。而且不能有效gate掉聚集的细胞(aggregate),G0/G1峰的CV值也会变大。而其它机型的激光是椭圆形的,光斑远远大于细胞,所以不存在这一问题。
虽然FACSAria在检测DNA含量方面看起来有点先天不足,但还是可以通过降低液压、流速,调整alignment等有所改进,要看操作员的本事了,据说有人也能做出比较标准的图形。
我想这样品不是你自己测的吧,如果是别人操作的,你让他show一下给别人做的图,如果很漂亮,说明这人已经很牛了,那还是你的样品的问题,呵呵。
Anyway,用FACSAria测细胞周期是给自己找麻烦呢。