小中大养的也是悬浮细胞,实验室也没有可以离培养板的离心机,查相关资料:可以用以下文献方法:1.周建军等,评价抗癌物质活性的改良MTT方法,中国医药工业杂志,1993,24(10):455-457
具体方法:
配三联溶解液:10%SDS,5%异丁醇,0.012mol/LHCL,蒸馏水溶解。
三联溶解液:SDS10g,异丁醇5ml,10M HCl 0.1ml用双蒸水溶解配成100ml溶液
操作:在培养板上加一定密度的细胞悬液,90ul/孔;如需给药,则再于同时(悬浮细胞)或4h后(贴壁细胞)加入不同浓度的药物10ul/孔,均设三复孔。另外,每块板上另没一个调零孔(只加培养液,不含细胞和药物)。培养2d后,加入MTT溶液20ul/孔,继续培养4h,然后加入上述三联液100ul/孔,于37度放置过夜后,用酶标仪测各孔A570值。
优点:简化操作,提高了可靠性。
解决方法2:用新试剂CCK-8,但是造价高。
但是我是准备这么做,还没有实践,而且原文并未找到,准备用上述方法一试。如果您能得到上述改良MTT的原文,还望共享。
我现正因为药物溶解问题郁闷。祝愿你试验成功。