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标题:[求助]悬浮细胞的mtt

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[求助]悬浮细胞的mtt



我养的淋巴细胞,加mtt20ul,4小时后细胞悬液变为淡紫色,将同一浓度的悬液放在一个离心管中(我们实验室没有甩板机),离心1000r,5min,弃上清,每孔加150ulDMSO,颜色没有什么变化,其他养贴壁细胞的同学做mtt最后都变成紫红色。不知道是哪步出错了,请高手指点!(急!)
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any333[使用道具]
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离心速度太低了,用10000r
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S6044[使用道具]
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悬浮细胞最好别用MTT,用CCK-8可以免去加DMSO的过程,直接上酶标仪检测。
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zranqi_1[使用道具]
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加MTT后4小时一般会有紫色的颗粒出现,这个就是活细胞和MTT 结合后的样子,而不是液体整体变色呀。然后用DMSO裂解这些颗粒才会有紫色的液体出现的。
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dongdongqiang[使用道具]
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加MTT后4小时一般会有紫色的颗粒出现,这个就是活细胞和MTT 结合后的样子,而不是液体整体变色呀。然后用DMSO裂解这些颗粒才会有紫色的液体出现的。
我加mtt后可看见紫色颗粒,但加DMSO后没有变紫色,是不是因为细胞数不够?我们实验室没钱 ,没有CCK-8。
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qhyu[使用道具]
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用Pippet 反覆吹打
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whitesheep[使用道具]
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养的也是悬浮细胞,实验室也没有可以离培养板的离心机,查相关资料:可以用以下文献方法:1.周建军等,评价抗癌物质活性的改良MTT方法,中国医药工业杂志,1993,24(10):455-457
具体方法:
配三联溶解液:10%SDS,5%异丁醇,0.012mol/LHCL,蒸馏水溶解。
三联溶解液:SDS10g,异丁醇5ml,10M HCl 0.1ml用双蒸水溶解配成100ml溶液
操作:在培养板上加一定密度的细胞悬液,90ul/孔;如需给药,则再于同时(悬浮细胞)或4h后(贴壁细胞)加入不同浓度的药物10ul/孔,均设三复孔。另外,每块板上另没一个调零孔(只加培养液,不含细胞和药物)。培养2d后,加入MTT溶液20ul/孔,继续培养4h,然后加入上述三联液100ul/孔,于37度放置过夜后,用酶标仪测各孔A570值。
优点:简化操作,提高了可靠性。
解决方法2:用新试剂CCK-8,但是造价高。

但是我是准备这么做,还没有实践,而且原文并未找到,准备用上述方法一试。如果您能得到上述改良MTT的原文,还望共享。
我现正因为药物溶解问题郁闷。祝愿你试验成功。
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skytree[使用道具]
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悬浮细胞做MTT 不太合适
首先就是离心的问题。
加MTT后,离心去上清的时候误差会比较大。
自己之前做的悬浮细胞MTT方法,供参考
1,调整细胞浓度,种板,设空白对照和阴性对照。
2,加处理因素。(前两步每孔不超过100ul)
3,设计时间后加10%SDS-HCL 100ul 过夜
4,酶标仪测量 A570
如果处理因素对MTT有影响或者可以溶解生成的沉淀物
设置处理因素的阴性对照
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shenkunjie[使用道具]
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周建军等,评价抗癌物质活性的改良MTT方法,中国医药工业杂志,1993,24(10):455-457
我也没有找到。
SDS 听说很难配 ,我还在查资料
实验室老师刚提出可以用离心管养细胞,直接离心减少细胞的损失,不知可不可行?
下次试一下。
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HP007[使用道具]
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我们用裂解液是15%的SDS,50%DMF ,加完MTT培养4-6小时后加裂解液,培养过夜然后震荡扫描的。不知是否你们的实验?颜色浅可能是细胞数目少或者活性低的原因吧?
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