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标题:[求助]如何使6孔板内的细胞均匀生长？

mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]如何使6孔板内的细胞均匀生长？




各位好！
我最近的实验中遇到一个难题无法解决，就是每次种在6孔板内的细胞生长得极不均匀，不是中间的密集，就是边上的密集。我在园子里搜了一下，发现对于这个问题也有人遇到过，但按照其改进的方法尝试后，效果不明显，不知哪位高手有此经验，请不吝赐教！
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那是由于培养箱不平的缘故，铺完细胞在超净台放置5分钟后再放入培养箱就好了，我以前也是这个问题，后来经人指点后发现的确如此
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发表于 2012-5-14 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

边缘效应，使培养板受热部均造成细胞沉降引起．接种完细胞，将培养板放置室温１－２小时，可以改善．
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我建议加完细胞再分别每个孔用吸管吹打2 -3次放平后就不在动它尽量水平放置!
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这里有许多人的方法，你可以参考一下：
1、板子内先加培养基，然后把细胞一滴一滴滴上去，盖上盖子，原地不动，关闭风机，20min后拿到镜下看看。 【mybbff】
2、先顺时针几圈，再逆时针几圈晃板子。然后在各个边用指头轻轻敲打。放培养箱。你过几个小时看一下。肯定是分散均匀了。【aaaadw】
3、分细胞到孔板里后，按东南西北四个方向分别倾斜几次，倾斜的同时水平轻轻摇动几下，每次倾斜时间小于5秒。之后细胞分布就会非常均匀了。【tiger22】
4、我基本上就是这样做的，先四个方向顺时针倾斜（左-上-右-下），每个方向停顿几秒，时间不必要过长，然后按照十字形方向（左-右-上-下）倾斜，细胞非常均匀！【civcul】
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
边缘效应，使培养板受热部均造成细胞沉降引起．接种完细胞，将培养板放置室温１－２小时，可以改善．

______________________________________________________________________________________________________________

我一直觉得是细胞的特性。嘿嘿
室温放置1-2H，这样可行么？6孔板内培养基3-5ml的缓冲体系，在室温下久了都会变颜色的。细胞老长时间没有CO2和适宜的温度，会停止分裂或者对它状态有较大影响吧。

每次吹丢细胞是要注意一定要吹到角角落落。不然象中间和边缘很容易细胞局部过度生长的。
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
六孔板边缘处很难进行吹打，我尝试上下、左右轻轻摇晃，六孔板不离开台面，效果尚可。
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以试试将细胞液配好后,从孔的边上加进去,再贴在台面上摇晃,可以的.
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xue258[使用道具]
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发表于 2012-5-14 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感谢诸位提供的宝贵意见，今天下午又做了一批，结果接种完静置于超净台5－8分钟，结果一观察，还不如原来的，细胞大批聚集于中间部位，仔细想想，可能与风机震动有关。明天再试试关上风机，看看是否真的与此相关。
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发表于 2012-5-14 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的六孔板是平板的么？
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