细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]配置1640培养液时，hepes应该什么时候加入最好？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 16  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]配置1640培养液时，hepes应该什么时候加入最好？

zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
1

发表于 2012-5-14 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]配置1640培养液时，hepes应该什么时候加入最好？




我们实验室的常规是：按一定浓度配置好hepes和 L-Glutamine，过滤，-20°冷冻，用一瓶新的培养基时再按一定体积浓度加入hepes和 L-Glutamine。使终浓度为1.19g/L。
但我看到帖子上很多人是hepes跟培养基一起过滤的。放置久了是不是对hepes 有影响？什么时候加入最合适，大家讨论一下。
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
2

发表于 2012-5-14 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

hepes跟培养基一起过滤的可以，但 L-Glutamine容易降解，-20°冷冻临用时加
顶部
Ao7[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76545
精华 1
积分 647
帖子 790
信誉分 102
可用分 4976
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
3

发表于 2012-5-14 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同时建议配培养液（好像不能称培养基）前，先接好纯水放置一段时间后再配粉末。当然要封口膜封，避免脏。
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
4

发表于 2012-5-14 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同时建议配培养液（好像不能称培养基）前，先接好纯水放置一段时间后再配粉末。当然要封口膜封，避免脏。

——————————————————

请问放置一段时间是何用意？
顶部
orangecake[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77305
精华 0
积分 512
帖子 724
信誉分 100
可用分 4431
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
5

发表于 2012-5-14 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们都是一起过滤的
反正在一个月之内用完
下个月就用新的了
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
6

发表于 2012-5-14 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 我的hepes都是当时加的，一起过滤，很方便。
后加问题太多：不容易定量；不容易控制PH值；也增加污染机会。
2. 为什么会放置过久？
如果按最严格的操作，培养基配好后两周内必须用完。两周内就不算过久了，为什么每次不能少配一些培养基。
顶部
jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
7

发表于 2012-5-14 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直做都不加HEPES，只加碳酸氢钠，没出过问题
因为我在资料上看过HEPES会对渗透压产生较大影响，而且一位养干细胞的博士也建议我不要加，我就试了，结果效果很好，所以一直都没有加
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
8

发表于 2012-5-14 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
配置基础培养基的时候加。
顶部
zhenxin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76024
精华 0
积分 748
帖子 1216
信誉分 100
可用分 6848
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-31
状态 离线
9

发表于 2012-5-14 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是配置培养基同时加入。
加入HEPES的培养基，PH很稳定，不加的PH容易下降。
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
10

发表于 2012-5-14 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
两周内就不算过久了，为什么每次不能少配一些培养基。

————————————————————————————————

1袋1640，配1000ml。如果养细胞不多，两周肯定用不完。
顶部
 16  1/2 12››