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标题:[求助]为什么细胞总是消化不下来

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-15 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]为什么细胞总是消化不下来




我最近养原代胰腺干细胞,用0.5%FBS无糖培养液纯化4周后,加入扩增培养液细胞已长满并出现小的细胞集落。本准备将细胞消化后传代，但是用0.25%胰酶(胰酶已验证未失效)37度消化超过40min细胞仍贴壁很好，无法吹下来不知道是怎么回事，望各位高手帮忙。
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skytree[使用道具]
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发表于 2012-5-15 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化之前要用生理盐水冲洗细胞两次，把培养液冲洗干净胰酶才好用的。残存的血清可以让胰酶失效。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 skytree 的帖子

我前面已经用PBS洗过两次了。
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

试试含EDTA的0.25%胰酶.
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ending[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胰腺细胞是不是容易成团生长啊？我养的胰腺腺瘤细胞也是很不好消化，胰酶中已经加入了EDTA，可是仍然不容易消化，奇怪的是一个培养瓶中小部分细胞貌似对胰酶敏感，片刻就变圆漂起来了，还有大部分长时间都没反应。

细胞是“老化了”对胰酶敏感，还是状态良好时（长得比较“嫩”）对胰酶敏感呢？
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般commercial的typsin都含EDTA的吧??
另外還有幾個tips,
PBS沖洗的時候,可以不用很快吸出,可以讓細胞在PBS中泡個幾十秒,讓一些unfavoble的東西有時間釋放出來.
另外可以適當提高typsin的濃度,偶曾經在做一種細胞時,用5X的,那種細胞(具體名字忘了,是一種人類正常上皮細胞)用1Xtypsin是洗不下來的.
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议你用含EDTA的胰酶，消化前用pbs冲洗细胞，也可直接用胰酶冲洗。加消化液后置培养箱。消化一段时间后仍然贴壁很稳的话可以重复上面的操作。
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newway[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的也是下不来啊，我养的是肾小球内皮细胞，今天放了胰酶，没有EDTA的，在37度放了超过二十五分钟了，还是没有全部消化下来，最后还是有一部分留在瓶底上了。请问哪位高手赐教一下吧。是不是肾小球内皮细胞本身比较难消化呢？
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ending[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以这样：
先用含EDTA的胰酶消化试试，如果这样的胰酶都不可以的话，你可以用细胞刮往下刮，我们实验室就是这么做的
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DDD[使用道具]
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发表于 2012-5-15 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刮下来还可以养吗？不会成团？
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