小中大[求助]用药组细胞变大该怎么选定对照细胞
最近在做凋亡实验,annexin V+PI双染、rhodamin123测膜电位改变,都用的流式细胞仪,但碰到一点问题,希望高手能帮忙解惑
前期结果证明药物有明显的G2期阻滞作用,显微镜下观察到用药后细胞体积变得非常大,是正常细胞的2、3倍,问题就在这形态改变上。流式检测时要圈定一定位置上的一团细胞,用药组细胞体积变大后就没有与对照相对应的细胞,即若按照阴性对照组圈定位置,用药组细胞变大后在对应位置的小细胞数目就非常少;若圈定用药组的大细胞,对照组在对应位置又没有大细胞来做比较。
帮我检测的老师按经验都是以阴性对照的小细胞为准圈定对照位置,这样的话用药组的结果也是将对应位置的小细胞与阴性对照比较后得出,我觉得不太妥,因为药效之一就是明显的引起细胞变大,用药组还没变大的小细胞可能是还没发挥药效的细胞,把它们跟正常组的细胞比肯定都是没多大改变的,这也许就是我一直得到阴性结果的原因?
请高手帮忙,这样的情况应该怎么选定对照细胞呢?