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标题:[求助]关于细胞培养的污染问题

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发表于 2012-5-18 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于细胞培养的污染问题



分离了2次肝星形细胞，都被污染了。
在接种培养不到12h，大约2h左右就可以看到有细杆状（短的是杆状，长的形状不规则，中间可以扭动，而且长短不一）物游动，而且方向朝一个方向运动，有的两端都可以摆动。虽然刚接种后观察没看到（有，但可能很少），第一次刚培养4h培养基就变黄了，长满了此物，增殖很快。
根据这些信息不知有人知道是什么来源的污染？谢谢。忘记拍图了。
灌流液及酶液都经过0.22um微孔滤膜过滤了。是菌类还是动物污染？
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发表于 2012-5-18 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请高手指点，再次谢谢！200X


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发表于 2012-5-18 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是霉菌污染
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发表于 2012-5-18 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先做个营养液培养，估计是营养液污染了，最好换新的营养液，用新的细胞，若细胞实在稀缺，你的细胞要是贴壁很好的话，可以用d-hank's或pbs用吸管使劲冲洗N遍，再用新的营养液。我去年污染的也是棒状的小东西，活动性很好，到处乱跑，繁殖极快，双抗不起作用，最后发现营养液污染了，用换膜滤器重新过滤营养液也不行，最后将贴壁好的大肠癌细胞冲了N遍，用新液才就过来，而贴壁不好的神经母瘤细胞则全换新的。这是我被污染的虫子：


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发表于 2012-5-18 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚培养4h左右，观察污染和楼上的很像，应该就是吧。但是早上我一看，棒状的东西几乎全没了，变成了小黑点，会闪动。培养液变黄了。
我用的是新的培养液，而且别人用的也是这个牌子的，血清也可以排出污染。会不会是小肠来源的。
让我感觉奇怪的是：4h看到的是杆状，早上（约12h）看到很多点状的，100X看不到，200X可以看到，不断闪动（黑色点状，没有荧光）！
急呢，养了好几次，都是同一个污染，昨晚加了约1ml的100X双抗，可是都没有抑制效果，液都黄了，到底是什么污染呀？继续求助！有什么解决办法呢？能不能抑制其生长？谢谢啦。
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-5-18 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分离了2次肝星形细胞，都被污染了。
在接种培养不到12h，大约2h左右就可以看到有细杆状（短的是杆状，长的形状不规则，中间可以扭动，而且长短不一）物游动，而且方向朝一个方向运动，有的两端都可以摆动。虽然刚接种后观察没看到（有，但可能很少），第一次刚培养4h培养基就变黄了，长满了此物，增殖很快。
根据这些信息不知有人知道是什么来源的污染？谢谢。忘记拍图了。
灌流液及酶液都经过0.22um微孔滤膜过滤了。是菌类还是动物污染？

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原代？细胞株？
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发表于 2012-5-18 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 junjie05 的帖子

原代的啊。已经判断，霉菌污染的可能不大，那张图压缩了下，所以看不大清楚，不是菌丝。和霉菌污染的指标不一样。经人指点，说是黑胶虫?
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发表于 2012-5-18 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得是不是你的incubator有污染的可能？建议好好消毒你的incubator。

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请问，你是做大鼠？还是小鼠？
肝脏消化的时候时间和collagenase的浓度怎么掌握的？
我也在原代，虽然能养出来，但是有个问题就是isolate完了后，HSCs的数量有点少，想提高细胞数。我现在一个小鼠能取80*10000个细胞左右。
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发表于 2012-5-18 13:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #8 junjie05 的帖子

兄弟，我也在摸索中啊。C57小鼠的，消化20-30min，磁力振荡，气浴38度。collagenase IV 50mg 50ml，效果还行。但有部分包膜部分组织没有消化下来
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junjie05[使用道具]
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 小中大
呵，我用的是collagenase type I， 180ml/L加入到消化液，37度水浴锅震荡消化30分钟。效果也还行。但是组织还是不能完全消化，剩下不少大块。
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