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标题:[求助]小鼠的肝脏STELLATE CELL与其年龄成正相关吗？

superboy[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]小鼠的肝脏STELLATE CELL与其年龄成正相关吗？



最近培养stellate cell 每次消化的都很好。
但就是最后能取到的细胞数不多。都是照protocol做的，我们一个老实验员也看不出我哪里错了。但每次一只小鼠只能收到20万。可另外一个同事可以拿到一百万呢。
老板说可能是鼠太年轻了。
大虾们，能不能告诉我鼠龄和stellate cell数量的关系呀？
应该多少月龄的鼠能取的比较多呢？
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发表于 2012-5-19 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
已经很多了！我还没看到HSCs呢，分了好多次啊，郁闷，估计protocol都有问题，自己摸索呗。
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发表于 2012-5-19 12:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该有关系，看文献发现，年老的mouse或者经过特殊喂养的如vitA，其HSCs数目比较多，获得细胞数就多。但是太老或者经过特殊处理的老鼠毕竟会对实验造成误差，所以还是尽量选择合适鼠龄的老鼠吧，我用的是10周龄左右的mice。
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发表于 2012-5-19 12:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
昨天同事让我用了只5个月的老鼠分,得了25万,然后又从kuffer cell的层里分了12万,加一起37.5但纯度就下降点了!
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发表于 2012-5-19 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是一只小鼠一般有多少stellate cell呢?
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发表于 2012-5-19 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的很牛。我想知道你是如何纯化HSCs的？谢谢
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发表于 2012-5-19 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
昨天同事让我用了只5个月的老鼠分,得了25万,然后又从kuffer cell的层里分了12万,加一起37.5但纯度就下降点了!

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请问，如何从Kupffer 层里 把hsc分出来的？谢谢
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是菜鸟,就按照实验室里的PROTOCOL做的.
加OptiPrep后离心,使HSCs分出来后用剩下的沉淀,加浓度更大的OptiPrep,然后加稍低密度的OptiPrep,再加GBSS,这样一来形成三个液平,然后离心,Kuffer cell在下面两个液平间,HSCs在上面两个液平间.
不过这样的方法并不好,第二次得到的12.5万HSCs纯度不高了.
还是第一次分出来25万纯度高,我没有做纯化(也不会>_<!),就在显微镜下自发荧光的方法看了一下,大概有90%以上.
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