小中大说实话, HSCs 分离,其他的问题都不大, 关键在密度梯度离心这块,.
你分过大鼠的么?用的是NYCODENZ铺梯度么?
大鼠肝星状细胞的浮力密度范围在1.047-1.061g/ml左右, 分细胞的时候可以上限订的高一些, kupffer的在1.083-1.095,你可以根据这个去计算下你需要的剃度.但这只是大致的范围,具体到每个细胞来说,肝细胞也有密度小的，很多时候剃度离心下来,发现有些肝细胞也浮上来了.
所以说得率好解决,但纯度是个很头疼的问题.
肝细胞可以通过离心去除,50gX2minX2次,进本上没什么影响,有文献什么CL2MDP处理去除kupffer的,我本来也想试试,但是涉及到做脂质体,要买各种试剂,比较麻烦,也就放弃了.
至于离心力,1600G我也试过,好象是没什么影响,细胞也出来了,我还要好好考虑这个问题.
所以只好在个方面实验条件稳定的情况下,自己慢慢摸索出一个合适的梯度.
小鼠的hsc和的大鼠的浮密度肯定稍有不同,这又是两者的差别.
下面是个图,分离后48h的,种的比较稀,种了三个100mm培养皿,杂细胞很少,几乎是没有的,
但是如果用原代得,实验分组多,三个大皿的得率是不够的,
然而得率和纯度是鱼与熊掌不可兼得的,要想有6,7个皿的细胞,那么肯定是杂的.
