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标题:[求助]分离小鼠肝星状细胞

ALALA[使用道具]
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发表于 2012-5-19 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]分离小鼠肝星状细胞




我们实验室想大量分离小鼠的肝星状细胞，参考的是大鼠肝星状细胞的分离方法，即穿刺肝门静脉，原位预灌注10分钟，再将肝离体，酶液灌注40分钟，再剪碎消化。
但小鼠实在是很难操作，稍微不小心，针就刺不准位置，肝离体后更是找不到血管如何再灌注。因为我们的小鼠比较多，整个过程太耗时间，各位高手，请指点一下吧，或者有什么更好的分离方法介绍一下，谢谢。
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发表于 2012-5-19 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做，现在原位灌流掌握的比较好，准确率大概10只有9只能成功灌流了。但是后面的密度梯度得率还是太少，得继续摸索了
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发表于 2012-5-19 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
给个链接：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=12208359&sty=1&tpg=1&age=0')

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/12033417')

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/10484009')

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/10921135')

有好多人关注这个细胞了。加油啊！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-5-19 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室想大量分离小鼠的肝星状细胞，参考的是大鼠肝星状细胞的分离方法，即穿刺肝门静脉，原位预灌注10分钟，再将肝离体，酶液灌注40分钟，再剪碎消化。
但小鼠实在是很难操作，稍微不小心，针就刺不准位置，肝离体后更是找不到血管如何再灌注。因为我们的小鼠比较多，整个过程太耗时间，各位高手，请指点一下吧，或者有什么更好的分离方法介绍一下，谢谢。

————————————————————————————————————————————————————

一个经验，我是第一次穿刺成功后，拿小鼠用的动脉夹固定血管和针，这样可以避免出现脱针现象。请参考。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-5-19 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做，现在原位灌流掌握的比较好，准确率大概10只有9只能成功灌流了。但是后面的密度梯度得率还是太少，得继续摸索了

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是的，这个问题我也还没有搞定，还是无法在一只老鼠身上得到足够的得率，下次用3只左右的老鼠取试试
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发表于 2012-5-19 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实很多东西都不清楚，说到Nycodenz，一般是买粉末自己配，但是用什么溶解呢，之后得到的密度怎么确证呢？不得而知！
一般是用GBSS或者Tricine-naoh nacl溶解，但是用哪个溶，得到的8%Nycodenz的密度是1.050g/ml呢？不知道。
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发表于 2012-5-19 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 DDD 于 2012-5-19 13:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
其实很多东西都不清楚，说到Nycodenz，一般是买粉末自己配，但是用什么溶解呢，之后得到的密度怎么确证呢？不得而知！
一般是用GBSS或者Tricine-naoh nacl溶解，但是用哪个溶，得到的8%Nycodenz的密度是1.050g/ml呢？不知道。 ...

我买opti-prep的时候，跟来了他的data sheet,上面写了你用不同的溶媒溶解的时候所得到的密度，不同的东西溶解，得到的密度不一样的。
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发表于 2012-5-19 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于nycodenz的浓度，可以参考说明书上的标准，用不同溶液溶解，密度有所不同。
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vera+[使用道具]
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发表于 2012-5-19 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们现在穿刺技术都练习的比较熟练了，关键是不能有气泡进去。
我们是用最小号的静脉留置针穿刺，手术线结扎，注射器灌注。
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vera+[使用道具]
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 小中大
是的，这个问题我也还没有搞定，还是无法在一只老鼠身上得到足够的得率，下次用3只左右的老鼠取试试

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国外文献上有写到用3只小鼠的肝脏加在一管梯度分离液里，1只肝脏太少了，离心后比较难看到细胞层。我分离的效率可能不是很好，一般都是4-5只一管。
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