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标题:[分享帖]小鼠肝星形细胞原代制备专帖

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发表于 2012-5-19 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[分享帖]小鼠肝星形细胞原代制备专帖


分离小鼠HSC的主要技术难度是：星形细胞在肝脏细胞中的比例很小，所以1只小鼠得到的HSC细胞数目也非常少。

主要步骤是两步法:
1. 胶原酶消化，得到细胞悬液。
2. 密度梯度离心，利用HSC细胞脂肪含量高的特点，与其他肝脏细胞分离开来。

问题：
1. 如何避免污染
2. 如何保证完全消化
3. 如何进行密度梯度离心
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发表于 2012-5-19 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. Re:常用原代动物细胞培养(征稿，报名从速) [精华] （RAT）
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1943108&sty=3&keywords=%B8%CE%D0%C7%D7%B4%CF%B8%B0%FB+DMEM')

这个是详细的大鼠方法，供参考

2. 【求助】肝星状细胞 （RAT）
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3310647_2.html?tpg=1')
好帖，单独列出来 juncaous为主要贡献者

3. 【原创】rHSCs isolation （RAT）
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=10438122&sty=1')
好帖，保护起来
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发表于 2012-5-19 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同的是密度梯度离心的介质选择是需要溶解的Nycodenz。而tk57ml选择是容易一些的optiprep。

我认为nycodenz也很好，关键是怎么去用。

楼上的知道nycodenz浓度和相应的buffer和密度之间的关系吗？
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发表于 2012-5-19 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我查到的文献是8.2%Nycodenz可以分离小鼠HSC，请问可行吗？

Beneficial effect of glatiramer acetate (Copaxone) on immune modulation of
experimental hepatic fibrosis
Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 292: G628–G638, 2007.
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发表于 2012-5-19 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近没有实验，呵呵，用GBSS配8.2%的Nycodenz就行了。
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发表于 2012-5-19 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以提供你的详细PROTOCOL吗？

特别是密度梯度离心操作这一步。我还没有考虑好怎么做。

配好的Nycodenz可以与细胞悬液混匀吗？还是不能混匀？怎样的体积比呢？
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发表于 2012-5-19 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我这周有小鼠可以做一次。另外我optiprep也定出去了。是否等它到货之后再做呢？还在犹豫中呢。
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发表于 2012-5-19 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人感觉Nycodenz不如opti，所以建议你等到货再实验。
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发表于 2012-5-19 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有一个问题请教：

你的Solution I 有考虑过渗透压吗？
按照我查到的资料，凡是加入HEPES的buffer 其中的NaCl需要减量，以维持等渗状态。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-5-19 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的也是C57小鼠，请多多交流。
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