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标题:[求助]原代细胞不贴壁

XYZQ[使用道具]
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[求助]原代细胞不贴壁




最近我和师姐在做原代细胞培养,细胞真是娇气啊,我们都是用的900多块一瓶的KSFM培养液,可是培养液加进去以后细胞一下子缩小了好多不说,而且5天了,一直不贴壁,培养液也有点浑浊,大家来帮我看看,怎么回事?

另外,我这里剩余有一些dispase分离酶,重庆主城有需要的朋友联系我。
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tieshazhang[使用道具]
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培养液有点浑浊是不污染了,如果污染肯定不贴壁。
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qumm1985[使用道具]
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应该是培养基有问题,是不是打开后很长时间了
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loli[使用道具]
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呵呵,楼主,那要看你养的是什么原代细胞了,并不是每一种细胞都那么好养的,原代细胞的培养,取材过程本身就是一关;再者,你的培养基有点混浊,可能是有污染了,原代细胞培养中这个污染的问题是比较常见的。
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dog002[使用道具]
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细胞能否贴壁除了与细胞本身的特性有关,很大一部分与培养瓶(皿)有关.其实只要选择合适的培养瓶及进行适当的预处理大多数种类的细胞是能贴壁的.
1.采用塑料的培养瓶相对与玻璃培养瓶更容易使细胞贴壁.
2.购买经特殊处理过的培养瓶瓶底含有特殊的物质如:聚苯乙烯塑料微载体能够促进细胞贴壁,优化其生长.
3.如果没有上述培养瓶,可用0.5%的明胶铺被.具体操作:配制0.5%的明胶高压灭菌,临用时取2-3ml左右铺在瓶底静置5分钟,弃取明胶液,将培养瓶放置培养箱中干后既可用.
4.若连明胶也没有,最简单的方法就是将无菌血清涂抹瓶底,干后即用.
以上方法效果都不错楼主不妨试一下.
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any333[使用道具]
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一次性培养瓶是最好的贴壁材料,不知楼主用的什么组织,什麽方法?

组织块一般不好贴壁,你可以用酶消化,筛一下,直接接种细胞,三天就行

至于细胞变小,若排除培养基的问题,那就可能是你消化过度了,细胞胀大造成的假象,自然不会有好结果
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XYZQ[使用道具]
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开始我没有讲的很清楚,我和师姐养的是原代宫颈上皮细胞,使用的dispase分离酶,细胞从组织分离下来的效果不错,一个一个挺多的。开始的一两天我们就是用一般的无血清培养基养的细胞。后来我在网上查到有些同学们养上皮细胞(如支气管粘膜细胞、皮肤角质细胞)都是用的KSFM培养基,我们就买了一瓶,离心以后种植在了一般的玻璃瓶培养瓶里面,KSFM培养液加进去的一瞬间原代细胞就变的比以前小很多,并且成串连在一起。第二天就看到培养液就变的很浑浊,镜下细胞也不贴壁,我们舍不得扔,继续培养,感觉细胞数目有增长,但是细胞就是不贴壁。实验失败?心痛中.....
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XYZQ[使用道具]
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星期一开始,我们又开始做细胞了,开始复苏肿瘤细胞,重新取材宫颈上皮细胞,但愿这次顺利。
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qumm1985[使用道具]
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我这里剩余有一些dispase中性分离酶,做实验没用完的,重庆有需要的同学可以联系我(*^__^*)
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wsll[使用道具]
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我和师姐养的是原代宫颈上皮细胞,使用的dispase分离酶,细胞从组织分离下来的效果不错,一个一个挺多的。开始的一两天我们就是用一般的无血清培养基养的细胞。

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原代细胞是依赖血清生长的,很可能你看见的细胞形态已经有问题了,而随后的“KSFM培养液加进去的一瞬间原代细胞就变的比以前小很多,并且成串连在一起。”并不是关键。
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