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标题:[求助]有关鸡外周血淋巴细胞培养

october7[使用道具]
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发表于 2012-5-19 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]有关鸡外周血淋巴细胞培养



请高手指点：
我最近在做淋巴细胞培养：从鸡的外周血中培养淋巴细胞，用的是人的淋巴细胞分离液，取鸡血3ml（用的抗凝剂是ACD）加入3ml D-Hanks，然后缓慢加入到含有3ml淋巴细胞分离液的离心管中，水平离心2000rpm 20min ,看见了明显的分层，然后吸弃上层的血浆在距离白色雾状的淋巴细胞层0.5cm处时开始吸淋巴细胞然后转入新的离心管中，加入5mlD-Hanks洗涤离心（不是水平离心）1500r/min.10min 弃上清，重复洗细胞1次，弃上清。然后加入2mlRPMI1640混匀，取出加到3cm的培养皿中，在加入10%的FBS和终浓度50ug/ml的PHA 刺激分裂，加好后让师兄帮我看了一下（因为我没有经验没做过这方面的实验），他说没看见淋巴细胞，培养一天再给师兄看还是没有，我自己又上网查了一些淋巴细胞的图片发现培养皿里好像确实没有淋巴细胞，不知道是怎么回事，请有培养淋巴洗吧经验的战友指点一下，另外还想问一下：悬浮细胞在观察时可以看到它在移动吗，我每次看细胞时移动培养皿都感觉有细胞在动，但不知是悬浮细胞还是没有贴壁的淋巴细胞？还有D-Hanks和Hanks平衡盐溶液HBSS是同一个东西吗，我可以用HBSS代替D-Hanks吗？另外附张图片 是培养两天后我吸取上清的图片，大家帮我分析分析，图中是淋巴细胞吗，谢谢不胜感激！


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发表于 2012-5-19 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

群友们有谁培养过淋巴细胞吗？有图片吗，可否传上来看看，我培养了一次可不知是不是淋巴细胞？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那些带尾巴的细胞应该不是淋巴细胞吧
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我在养人的淋巴细胞.带尾巴的细胞是肌质细胞,我老师说的.
不知道你是用的什么公司的分离液,离心后可以看到红细胞吗?我分离的里面怎么有很多的红细胞,操作方法和你的一样啊
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有白色雾状层就会有淋巴细胞,别担心.你那就是
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october7[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢了，那些带尾巴的细胞好像不是，淋巴细胞应该是原的，就像小圆点一样，我用的是华美的是人的淋巴细胞分离液，密度1.077，本来想找个鸡的淋巴细胞分离液，问遍了都没有而且也没查到鸡的淋巴细胞密度，就找了些师兄师姐的文献用的也是密度为1.077的淋巴细胞分离液。所以就用了。你说的红细胞会不会是因为你将稀释血铺到淋巴细胞分离液时分层不清晰啊，混了一些红细胞，应该可以通过加入裂解液去除吧！

我前几天又试了一下这次用的是1：1体积的淋巴细胞分离液，感觉效果还可以，我看像是淋巴细胞，发张图片让大家看看，另外，我最近养了一些肿瘤细胞系，发现里面有杆状的东西，不知是不是污染了，还是培养基中的杂质，有培养细胞经验的帮忙看一些吧！
第一张图是我把分离出来的细胞培养一天后吸取的上清又进行培养后的200倍下的照片，我觉得像淋巴细胞！


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发表于 2012-5-19 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外，我培养的肿瘤细胞中怎么有这个东东，战友们帮忙看一下！而且我感觉我移动培养基时它们也在动，我把它放大了就是这样的，上面的图是100，下面图是200倍，这是杂质还是污染？


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发表于 2012-5-19 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第二个图在这，两个图组合到一起太大了，呵呵，所以分开发的


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 小中大

还有当我调节焦距的时候当没到我目的细胞的视野时有个视野也是清晰的，上面有些乱七八糟的东东，不知是啥，我也照下来了，移动培养基时它是和培养基一起动的（就像粘在壁上一样）如下图，不像上面那个杆状的东西（移动时它会在里面晃一下）。这些都是些什么？
请大家指教，因为我以前做的都是分子方面的实验，刚接触到细胞，没经验，大家帮忙看一下吧！


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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你那就是淋巴细胞.我在养.明天还要继续分离呢.
你的肿瘤细胞我发现养的不是很好.1.大小很不一2.细胞不圆
上面那个杆状的东西是不是棉花丝,你要是用玻璃瓶养的话就有可能是上面的划痕迹.
最下面那个不知道
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