[求助]培养的细胞在没有CO2情况下能挺多久?

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标题:[求助]培养的细胞在没有CO2情况下能挺多久?

ququer787[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位同行,我培养细胞这么多年第一次遇到这件郁闷事儿：细胞房的二氧化碳罐前天晚上没气儿了,直到今天凌晨1点多才给送气儿(单双号限制,一切为了奥运嘛)! 今天下午一看,培养的用来传代的细胞(Hela、U2OS等)有半数漂起来了（还有我做过两次siRNA转染的细胞几乎全都挂掉了，损失惨重）,我只是希望剩下的贴壁细胞能在若干次的传代、换液后能恢复元气！
大家可否给点建议，我该如何办，难道非要重新复苏一管儿吗？
不知道你们有没有这样的经历。

131415[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最好重新复苏吧，你瓶里活下来的细胞多半是对PH或渗透压有耐受的细胞
如果这些细胞培养起来跟原来的是不太一样的。做出来的结果也不好说问题。
一般的CO2没了要赶紧换，没什么代替的方法。有种培养基L15是用高浓度的氨基酸来做缓冲体系的，这种培养基可以在37度的正常空气中培养，培养时是要吧瓶盖拧紧的。不过也不是所有细胞都可以用。

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，楼主，CO2的作用是调节培养基的pH值，如果你剩下的细胞还能贴壁的话，应该问题不大，那你就给它们换点20％FBS的培养基，多养一阵子吧，祝你好运。

caihong[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的老板以前在洛杉矶也遇到过这种事，他说没有多大影响，可是我心里还是觉得挺别扭的。
我决定先拿这批细胞重复一下以前做过的试验，如果结果与以前的结果一致的话，就直当这件事没发生过。
谢谢以上两位的关注！

eric930[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室也碰到这样的情况但是细胞没有飘起来
接下来的实验结果相差也不大也许不同的细胞情况不一样再一个看看你的培养基的颜色本来分红就是在不同的ph条件下会变色的

sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该可以活很久，我养过的几个胃癌肿瘤细胞株放在培养箱外面过了一夜都还活着

一叶[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果有冻存的细胞，我建议还是复苏的好。没有二氧化碳，培养基就会偏碱，这对细胞的生长是很不利的，我们都知道细胞耐酸不耐碱。即使细胞没有死，但细胞的超微结果和基因表达上已经有了变化，有可能对实验产生很大的影响。我就碰到过这样的问题，我当时养的是肿瘤细胞，经历过两次1天左右的缺二氧化碳，结果发现在培养是与以前有很大的不同。你这培养基偏碱的时间比较长，我建议还是复苏的好，免得到时候做不出来，再从头来就更麻烦。

xyw5[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵这个影响应该是不大的吧知道各位战友有没有到上海中科院细胞所拿过细胞没有他们都是提前一天晚上把细胞装在瓶子里拿出来验菌按照一些说法那不久直接挂完了？在往很多地方送的时候可能一两天呢。不过他们封口封的狠好，这种事情我碰到过很多次了，问题不大应该！仅供参考！
祝你成功！估计大家都用的是塑料培养瓶吧？

二丫头466[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

影响是有一点的,但是影响不大,你的细胞与楼的说的"有没有到上海中科院细胞所拿过细胞没有他们都是提前一天晚上把细胞装在瓶子里拿出来验菌按照一些说法那不久直接挂完了？"是不一样的,他们是在细胞培养到75%时紧盖后放置的,我觉得你将剩下的贴壁细胞能在若干次的传代、换液后肯定能能恢复元气！我做细胞培养已经二十多年了,这样的事常碰到,但是你也不要用楼上所说的20%小牛血清培养,用15%足也,不然可能会画蛇添足.

S6044[使用道具]
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发表于 2012-5-19 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

影响不是很大，我坐飞机带过一次，时间总共算起来有十几个小时。回来后立即换液，但一定要准备一瓶之前一直用的培养基。等细胞长的稳定后在换新配的培养基。

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