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标题:[求助]传代后细胞不贴壁

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1
 

[求助]传代后细胞不贴壁


不知道为什么最近细胞传代后总是漂着,不怎么贴壁,或者贴壁形状很不好,可能是什么原因?请各位大侠帮忙分析一下
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toy[使用道具]
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2
 

呵呵,不知楼主你养的是什么细胞?原代的还是肿瘤细胞系?你是用胰酶消化后传代吗?如果是的话,你可以适当缩短消化时间试试,也可以加0.02%的EDTA来帮助消化,可以缩短消化的时间。
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hela,消化大约两分钟,我一直观察的,一散开就立马拿去加培养基吹打分瓶了
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HP007[使用道具]
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一般4个小时就贴了,不贴的基本活不了,用的器具都干净吗?要泡酸处理
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5
 


QUOTE:
原帖由 HP007 于 2012-5-21 12:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

一般4个小时就贴了,不贴的基本活不了,用的器具都干净吗?要泡酸处理

对,移液管和血清瓶都是泡了酸的
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whitesheep[使用道具]
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6
 

hela,我养过,
没有出现过你这种情况啊。
建议你减少不必要的实验操作,
降低污染的几率。
这个季节,灭菌以后的物品使用别超过一周吧。
好运
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爱老虎游tt[使用道具]
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7
 
这是其他群友关于Hela的经验:
1、
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/534054_1.html')
2、
关于HELA 细胞的培养(引自peakw战友,见下帖
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1867722')
HELA 细胞生长很快一般一天既可传代。用含有10%小牛血清的DMEM培养。在传代时,将培基吸掉。然后用PBS洗一下,再加0.05%的胰酶放在培养箱中消化30秒,镜下观察细胞变圆即可用有10%小牛血清的DMEM终止消化,吸管吹打细胞后加入适量含10%小牛血清的DMEM放入CO2培养箱培养。
3、
可与自己的操作对比一下看有何不同,另附上ATCC关于Hela细胞传代的Protocol:
Subculturing: Protocol:
1)Remove and discard culture medium.
2)Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum which contains trypsin inhibitor.
3)Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
4)Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
5)Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
6)Incubate cultures at 37°C.
cuturl('http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx?ATCCNum=CCL-2&Template=cellBiology')
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@STAR@[使用道具]
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8
 

谢谢各位,我之前一直养的很好,细胞状态超级好,但最近才出现的这种状况,正在排除各种培养用品的影响,郁闷的是搞的我半个月实验做不下去!
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star#room[使用道具]
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9
 

水质有没有问题,有可能是细胞慢性中毒了,比如水中重金属离子高哦
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leifengta[使用道具]
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10
 

我最近养的Hela也是,状态也不错的,长得挺快的,就是每次传完都有不贴壁的死细胞。开始我以为是我吹打细胞太猛了的事,但是发现我们实验室一师姐养的也是如此,基本排除这个原因。我们推测这个细胞状态就是这样的。 因为相同条件下她同时期养的别的细胞系都没有问题。 考虑等秋天我再复苏一瓶细胞试试。
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