小中大【个人经验总结,仅供参考】:
我已经养了一年细胞了,一些本来就长得慢的细胞株我也经常碰到,但超过十天左右传一次代就已经算慢了,像你现在碰到的这种情况都22天了还传不了实属罕见,我个人认为:
1.首先确定你这瓶细胞是否还属正常状态,确定这类细胞株一般培养特性(可搜索查阅相关文献是否真有长这么慢的?),确定没有污染或还有细胞活性(显微镜下严密观察有无菌丝、异常漂浮物、细胞有无成团、细胞突触情况、培养液颜色及细胞代谢情况等),如果不正常了建议弃掉重新养瓶新的试试(我个人感觉这瓶细胞应该不行了);
2.如果还是坚持认为可以或想再试试,可以:a.增加血清浓度,可增至20%以上试试;b.重新加谷胺酰胺(1ml加到100ml,尤其是培养液配制已经超过2周);c.可试着添加少许β巯基乙醇刺激试试;d.“原地消化”,即重新消化一下让它重新贴壁试试看看;
3. 检查培养环境(培养液、培养瓶、培养箱)有无异常;
4. 经上述试验还是不行,则回到第一条,强烈建议重新养;
以上纯属我个人体会,供你参考,祝你成功!