[求助]做的dna ladder 帮我看下

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标题:[求助]做的dna ladder 帮我看下

zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

药物从左到右浓度逐渐减小，请高手帮忙分析一下最右边是对照

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2012-5-21 17:41

45658748.jpg (16.19 KB)

zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加大了曝光时间

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2012-5-21 17:42

77251971.jpg (18.92 KB)

greenbee[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做得不是很如意, 不太能说服人. 只有lane 5有隐隐约约的ladder, lane2和lane3显然是smear, 不是ladder. 但显然你的药物呈剂量依赖性的造成了细胞DNA的损伤, DNA操作应该说是比较成功的!

多数药物只在某段剂量范围造成细胞的调亡,而DNA ladder又在更窄的剂量和时间范围内产生, 所以建议你在lane 5的剂量周围再摸索药物剂量和作用时间. lane 2 和lane3 和剂量已经造成了细胞坏死,应该不适合做 ladder.而lane 6和lane7的可以保留做为小剂量的对照.

当然以上说法都建立在你已经重复了几次同样的结果的基础之上, 而且你的药物确实造成了细胞调亡(通过hoechest 染色或是流式的结果, 或者在境下观察到了调亡小体的产生).

此外, 建议你用photoshop处理一下图片整体的对比度和明暗度, 或许可以得到看得更清楚的结果.

greenbee[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我帮你贴了吧. 似乎是稍微明显了一些.

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2012-5-21 17:42

62603275.jpg (19.77 KB)

zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢你的建议，我的流式做的也不像凋亡，高剂量是碎片峰，没有凋亡峰
有没有好的方法简单验证凋亡？
我也ps一下看看。照胶的时候感觉带不是很亮，而且过一会就褪色，看不到了，不知道什么原因

zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这样看，似乎lane4 有200bp 的带，只不过拖的很厉害，量也很小

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2012-5-21 17:43

54473974.jpg (27.68 KB)

greenbee[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这样的胶照的应该是可以的了, 基本上照片都是需要ps修改对经和明暗的.

关于简单方法检测凋亡, 我上面已经提到了.

第一就是境下观察. 在一定药物剂量和时间下, 仅在普通倒置显微镜下即可看到细胞分裂为几个具有完整细胞膜的小体, 即"凋亡小体", 呈具有较圆滑边缘的小规则型. 凋亡小体形成时或是即将形成时期做ladder是最佳的时期. 当然这需要药物可以产生比较典型的促凋亡作用.

第二就是 hochest 染色, 经染色后的凋亡细胞在荧光显微镜下可以看到细胞核分裂为几个小亮点, 而未凋亡细胞则是一个较大的圆型亮点. 坏死细胞不具备这些特征. (有时还能看到正在有丝分裂的细胞, 很PP的).

关于凋亡检测, 园子里还有很多好贴, 搜之..........

zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

hoechest 可以区分坏死和凋亡吗？

greenbee[使用道具]
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发表于 2012-5-21 17:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 zranqi_1 于 2012-5-21 17:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
hoechest 可以区分坏死和凋亡吗？

本人认为可以. 下面是我做的一个图. 箭头为凋亡细胞. 其它的DNA为小点状的也是. 可以看到正常细胞是一个整体. 坏死细胞没有确认过, 但应该不会呈小点状, 或者与正常细胞相近?