细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]关于细胞计数受否乘稀释倍数问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[求助]关于细胞计数受否乘稀释倍数问题

北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
1
 

[求助]关于细胞计数受否乘稀释倍数问题




细胞计数时什么情况需要乘上稀释倍数?当一瓶培养细胞需要计数细胞数时是否乘上稀释倍数,求教高师!!!
顶部
abc816[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77362
精华 0
积分 775
帖子 1190
信誉分 100
可用分 6817
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
2
 

培养细胞计数法:
细胞悬液制备后,要计算所含的细胞数量。一般以细胞数/毫升表示
用品:细胞悬液 培养液 计数板
程序
1用酒精冲洗计数板后 擦净,将盖片覆在计算板上,微微移向一侧,
以便滴加细胞悬液.
2取一吸管伸入培养瓶,轻轻吸打细胞悬液混匀。
3从盖片边缘滴加细胞悬液,使其充满计数板和盖片间的空隙中
注意:勿使液体漫过盖片或出现气泡。
4镜下观察计数 计算计数板的四角大格内的细胞数,压线者只计算
左侧和上方的,右和下的不计算在内。
按下式计算:
细胞数/毫升源液=(4大格细胞总数/4)*10000*稀释倍数
注意:
镜下计数,有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算
如细胞团占10%以上,说明消化不充分,或细胞数少于200个/10平方毫米
或多于500个/10平方毫米时,均说明稀释不当.需重新置备细胞悬液,
再计算。
顶部
铜雀[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76992
精华 0
积分 344
帖子 365
信誉分 101
可用分 2611
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
3
 

呵呵,楼主,如果你在计数时,用1ml的液体重悬细胞,就不用考虑稀释倍数的问题了。
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
4
 

同意楼上的,1ml重悬,取1ul计数
顶部
北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
5
 

再求助高师;一;将一瓶培养细胞消化后离心,再用5ml培养液悬浮后取一滴计数,是否需要乘上稀释倍数5?二;细胞计数是密度还是浓度?有人计数不乘稀释倍数这是为什么?
顶部
toy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77357
精华 0
积分 716
帖子 1052
信誉分 100
可用分 6165
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
6
 


QUOTE:
原帖由 北风那个吹 于 2012-5-22 13:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

再求助高师;一;将一瓶培养细胞消化后离心,再用5ml培养液悬浮后取一滴计数,是否需要乘上稀释倍数5?二;细胞计数是密度还是浓度?有人计数不乘稀释倍数这是为什么? ...

? 关于第一点: 你是如何判断稀释倍数是5的? 除非消化前你的培养瓶内的培养基是1 ml. 而这一点显然是不可能准确计算的. 更何况你既然用了消化,就是贴壁细胞, 不是细胞悬液, 消化前是谈不了细胞密度或是浓度的. 所以你想知道的,或是能知道的就是消化,离心,重悬后的细胞终浓度, 从中取一滴(准确说是10 ul等), 反应的就是当前5 ml体系内的细胞浓度. 当然不用乘5, 5 从何而来呢?

关于第二点: 细胞计数计的可以说是密度: density. 也可以说是浓度, concentration. 一般用density的说法. 当然这里的密度不是指物质的相对密度.

最后一问: 乘稀释倍数是指有时细胞生长密度或是在重悬培养基中的密度过大, 用细胞计数时在一个小方格内难以依次准确记录(俗话说是"数不过来了"), 这时就需将培养液中的细胞在另外一个容器中取少量进行一定比例的稀释, 以便于"数". 一般稀释后细胞在 1 乘 10 的 5 次方, 到 1乘10的7次方内较好. 1 乘10 的 6次方是比较理想的, 这个范围内误差较小. 这时由于稀释后的细胞浓度由于不是我们要得到的原重悬液中的细胞密度, 就必须乘以稀释倍数以得到目标细胞悬液的初使密度.

突然觉得我是不是把一简单问题复杂化了? 晕!!
顶部
北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
7
 

感谢高师的解答!还想问一下老师,从原培养液中取少量进行一定比例的稀释后乘上稀释倍数,是否还要乘上原液总量?即;4大格细胞总数之和/4X104x稀释倍数x 原液总量?高师给一下公式?再次感谢高师指点!!!
顶部
toy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77357
精华 0
积分 716
帖子 1052
信誉分 100
可用分 6165
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
8
 


QUOTE:
原帖由 北风那个吹 于 2012-5-22 13:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

感谢高师的解答!还想问一下老师,从原培养液中取少量进行一定比例的稀释后乘上稀释倍数,是否还要乘上原液总量?即;4大格细胞总数之和/4X104x稀释倍数x 原液总量?高师给一下公式?再次感谢高师指点!!! ...


你呀, 为什么不思考一下原理呢? 这是数学问题, 不是技术问题. 仅用单位乘乘看, 你的公式得到的是什么单位?

自己画个示意图看看吧.
顶部
ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
9
 
再求助高师;一;将一瓶培养细胞消化后离心,再用5ml培养液悬浮后取一滴计数,是否需要乘上稀释倍数5?二;细胞计数是密度还是浓度?有人计数不乘稀释倍数这是为什么?

————————————————————————————————————————————————————————————————

确实是数学问题试着回答一下:
1. 需要乘上5(mL),注意这是5mL,而不是5倍。结果是细胞总数(浓度X体积)。
2. 细胞计数的直接结果,其意义是多少个细胞数*10000/mL,同普通意义的密度和浓度都不一样。计数的目的是获知细胞总数。所说的稀释倍数实际是细胞悬液的体积。

楼上战友回答的很详尽了,再罗嗦一下,希望能茅塞顿开
顶部
abc816[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77362
精华 0
积分 775
帖子 1190
信誉分 100
可用分 6817
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
10
 

再说下 细胞消化后的计数为每ml中之细胞数目。计数器其实也是个容器,血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber中细刻9个1mm2大正方形,其中4个角落之正方形再细刻16个小格,深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0×10-4ml。使用时,计数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以104,即为每ml中之细胞数目。如果要计算你的方瓶中的细胞数就还要乘以你未稀释的、终止反应时的体积数,就是你的方瓶的总的细胞数
希望我说明白了
顶部