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标题:[求助]怎样养鼠巨噬细胞系 RAW 246.7

remenb[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]怎样养鼠巨噬细胞系 RAW 246.7



我正在培养鼠巨噬细胞系 RAW 246.7,不知道应该用DMEM还是1640养,而且觉得好难消化下来,请问各位战友有什么好建议的
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是用的DMEM，还不错；胰酶的问题是你没有调PH值，偏碱一点就可以了。
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在正在养这种细胞，状态很好的，用的是１６４０，也没什么特殊要求，
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用1640养，胰酶浓度不可以太高，0.025%胰酶+0.2%EDTA。刚开始时不太容易消化，传几代就好消化了。我曾经用0.25%胰酶+0.02%EDTA，把细胞都消化死了。注意不要消化过度，这种细胞还是很好养的。祝你好运！
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，对了。我也用IMDM养过这种细胞，张得很好，但做流式时发现与1640比他的分化程度出现明显变化，建议你还是用1640吧，ADCC就让用1640。但是1640营养成分低需常换培养液（一天一次），不要当成污染。
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人认为用1640相对比较好。我的经验是开始的时候血清浓度要比较高一点，我曾经用的是50%，结果有95%成活，你可以试验一下的。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

弃去培养液，PBS冲洗一下。加1-2毫升胰酶(0.025%胰酶+0.2%EDTA)，37度边观察边 消化，细胞松动后，加0.5-1毫升10%FCS-1640（中和胰酶）。再加少许PBS，吹打下来。移入小试管中1000rpm,5min。再用PBS洗一次1000rpm,5min。用10%FCS-1640重悬细胞，分瓶
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-5-22 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的RAW246.7, 在消化完放入培养瓶内第一天长得很好,有一部都已经伸出伪足了,但不知道怎么的,第二天就开始大片的漂起来,第三天就全部都漂起来了.我用的DMEM(低糖)+10%胎牛血清. 请各位帮帮忙,是不是我的细胞污染了?
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发表于 2012-5-22 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有人做过这个细胞的转染，我每次转染的效率都非常低。
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发表于 2012-5-22 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用RAW264.7做过稳定转染的细胞株，效果还不错。
瞬转效率相对低一些，但也不会太低。
其实养RAW264.7的关键在于防止其分化成巨噬细胞，一般分化了的细胞状态都不会太好，而且也不会再生长了。
我用的是高糖DMEM+10%的胎牛血清。当然血清质量一定要好。
RAW264.7的传代一定要及时，一般隔天传，最好不要超过两天。传代的方法：弃去血清，直接加入胰酶（0.125%trypsin+0.03%EDTA),不要用PBS洗，这样剩余的血清可以缓解胰酶的消化作用。大约1分半后，将胰酶倒掉，轻轻拍打培养皿底部，可以看见细胞漂起来了。拍打有两个好处：一是可以去掉分化成巨噬细胞的那些细胞，那些细胞通常贴壁比较牢；二是RAW264.7对于机械的吹打比较敏感，可以省去吹打一步，使细胞状态更好。
然后加入一定血清的DMEM,离心，再重悬，计数，按照2.5-5.0*104/ml的密度传代。这样细胞状态通常都比较好。
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