[求助]请大家帮忙看看我的细胞是不是黑胶虫污染了！

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标题:[求助]请大家帮忙看看我的细胞是不是黑胶虫污染了！

bongte[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位战友，我的PA317细胞在转染了逆转录病毒质粒经过嘌呤霉素筛选后得到了一个稳定的细胞系，但是最近发现我的细胞培养液里面有很多黑色的小点，大部分在原地运动，有些呈现穿梭运动，但是培养上清仍然是清凉的，没有变混浊。用了双抗和卡那霉素、红霉素后没有什么效果，不知各位战友遇到过这种情况没有？应该如何解决？谢谢了！！现将我的细胞照片帖上来，请大家帮忙看看！

附件

2012-5-22 16:04

28815464.snap.jpg (23.67 KB)

bongte[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图2 是放大400倍时照片，细胞生长不佳，镜下可见大量的球形结构，内有大量的小黑点，局限于球形结构内做布朗运动，当球形结构破裂后释放进入培养液中，细胞形态发生改变

附件

2012-5-22 16:05

23242624.snap.jpg (18.27 KB)

bongte[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图3是另一张放大400倍照片，细胞生长不佳，镜下可见大量的黑色小黑点，在局部做布朗运动

附件

2012-5-22 16:05

37279739.snap.jpg (23.67 KB)

831226[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到过这种情况，有人说是黑胶虫污染，但究竟什么是黑胶虫目前没有个统一的说法，建议你先换个液，用PBS好好洗下，我的细胞就是这样处理后就好了。

bongte[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #4 831226 的帖子

我几乎是每天都用PBS洗涤细胞，每次都用洗4遍，洗过之后细胞好了很多，但是过几天后又是老样子，而且细胞生长很慢，不知道你是否还用了什么抗生素没有？

831226[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

从你的描述看你的细胞的确是被污染了，我的经验是所谓的黑胶虫抗生素是没有用的，其最大的特点就是细胞不会全部死亡但增殖很慢，如果实验要求不高可以将就用，最好是重新复苏了。

bongte[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞是转染了逆转录病毒质粒经过1个多月的嘌呤霉素筛选后才得到的珍贵细胞系啊，本来指望它产生逆转录病毒去感染其他的目的细胞建立稳定转染的细胞系呢，结果正准备冻存的时候就发现了这种情况，好郁闷啊！！

hyuu[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

镜下可见大量的球形结构，内有大量的小黑点，局限于球形结构内做布朗运动
这东西是什么？我得细胞里面也有，非常想知道这是什么？

zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

球形结构，和细胞不在一个层面上，好像长在细胞上面，不知这个到底是什么东西，刚传代时不太明显，也不影响细胞生长，细胞长满了以后这个东西就很明显了，一团一团的。

yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-22 16:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在出现这个之前，有没有更换培养基或血清什么的？一直都是你在操作吗？出现前后你的又没有什么变化，细胞培养的地方，卫生条件，还是超净台环境变了？多久出现的现象呢？

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