[求助]关于流式细胞的几个问题。

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标题:[求助]关于流式细胞的几个问题。

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教：

流式中使用PI（1微升每毫升）复染是基于什么要求和原理？

之前需要使用350纳米的紫外线激发，是不是有许多流式细胞仪都带有此功能？如果带有紫外光激发，是否一定是350纳米的呢？

双波长检测（红光，蓝光？）是怎么回事啊？

恳请指点！！！

911[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

911[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PI为水溶性核酸染料, 所以通常用流式来检测细胞周期,或判断细胞死活(活细胞拒染).确激发波长488nm. 所有流式都有的激光(488nm氩离子激光).

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢！我做的正是SP细胞。

用Hoechst33342染色后，用PI复染。
我认为是用来去除死细胞的，不知道对不对呢？

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1, 带有紫外激光的流式不多, 紫外光波长330-366nm(Multi- UV0,在350nm(Single Line)处最佳.目前只有BD公司 FACSVantage, BeckmanCoulter公司 EPICS ALTRA, DAKO-Cytomation公司Moflo可以装配大功率的紫外激光. 其他如: PARTEC 公司的
PAS III 和 BeckmanCoulter公司的Quanta SC等配有汞灯, 也可以有紫外光.

2, 双波长检测: 红光: 是指染料(HOECHST)被激发后所发射出的波长, 通常用670LP(长通滤片接收); 兰光: 是指染料(HOECHST)被激发后所发射出的波长, 通常用480nm左右滤片接收. 如在SP(肿瘤干细胞检测中), 红光, 兰光弱表达被视为SP, 还有最早检测细胞凋亡也用过此方法, 随着时间变化,看红光向兰光的迁移.

3,你做的是什么实验? 只说PI复染,很难理解.

————————————————————————————————————————————

请问：大功率的紫外激发和汞灯发射的紫外光有什么区别吗？

不知道你对与肿瘤干细胞检测有什么经验？分离出来的SP细胞应该如何培养呢？

我头一回做，准确来说是准备要做，实际上还没做呢。

glass[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

SP的最佳接受滤片组合为450BP和675LP。

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Flow cytometer with UV laser (usually high-power argon tuned to 351- to 364-nm
excitation) and standard 488-nm laser
450/20 band-pass (BP) filter
675-nm edge filter long-pass (EFLP; Omega Optical)
610-nm dichroic mirror short-pass (DMSP) filter

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

汞灯出来的是含紫外段的连续谱线光，通过滤片排他输出紫外。水冷出来的就是紫外激光，谱线纯，功率高，不是汞灯可以比的，当然发热量和电耗也很厉害。如果汞灯出来的紫外功率哪怕是能接近水冷激光的水平，还要水冷干嘛呢？但是汞灯可以实现小型化，水冷不可以，所以compact机型要出紫外只能上汞灯。记得还有一种太监型的激光管叫enterpriseII，号称既能出紫外又能出488，而且空冷，省地儿。实际上紫外就100mw左右的水平且衰减快，基本等于废功，呵呵。
50mw的MLUV就够做SP实验了，但是基于HO33342的特性，shapiro明确建议应该使用100mw以上的紫外，CV才较为理想。所以做分选还是用大机器加100mw以上的紫外为宜

newway[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果做SP检测,用PI复染的目的是去处死亡细胞,这样一来,需要用到488n和UV两种光源, 国内这样配置的仪器并不多.

newway[使用道具]
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发表于 2012-5-22 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Enterprise II的激光确切讲已经停产了. 也有文献用改良的滤片做.
Side Population Is Enriched in Tumorigenic, Stem-Like Cancer
Cells, whereas ABCG2+ and ABCG2 Cancer Cells Are
Similarly Tumorigenic
Lubna Patrawala,1 Tammy Calhoun,1 Robin Schneider-Broussard,1 Jianjun Zhou,1
Kent Claypool,1 and Dean G. Tang1,2
1Department of Carcinogenesis, Science Park-Research Division, The University of Texas M.D. Anderson Cancer Center, Smithville, Texas
and 2Program in Environmental and Molecular Carcinogenesis, Graduate School of Biomedical Sciences, Houston, Texas

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