小中大我对流式样品处理也是摸索了很久，尝试了各种方法，
应该说楼主的方法也是可行的，细胞悬液不能超过100微升，这样可以注入到1ml预冷的固定液，我用的细胞比较多，就把细胞重悬浮于500微升PBS，注入5ml预冷固定液。这个方法的好处是比较快，细胞也不会聚集成团。把细胞注入固定液后就不必再吹打了，4度固定至少30分钟即可。
楼上说的逐滴加入固定液的方法我也试过，边加边震荡，就是有时候细胞多了觉得比较费时间。不管是那种方法，都保证细胞悬液体积不要超过总体积10％。
我用的固定液一直是70％乙醇，还有乙醇和甘氨酸的配方（7体积无水乙醇和3体积50mM glycine，pH2.0），和楼上以及楼主说的75－95％乙醇有点出入，不过固定的效果也还不错，关于这一点，希望能和楼上探讨一下。
关于离心速度，不同的细胞可能还不一样，在能离下来的情况下，尽量用更小些的离心速度，这样resuspend更容易也不易形成团块，如果觉得细胞量丢失很多，只好增加离心速度了。另外甩平头的离心机似乎效果比固定角度离心机好一些。
