小中大
没试过你那方法，我经常做药物抑制增殖，方法如下，供你参考：
1，MTT是个好方法，有改进过不去上清的kit，认可度还是比较高的。
2，如果编辑认为MTT不可信，会让你补做氢三掺入，8块钱一个样，很权威，不过孔间差异很大，一般是洗板机的原因，所以建议你多做副孔。
3，流式作CFSE stain，认可度一般，其实做了氢三就可以了，没什么必要。只看t细胞的话，干吗不试一试CD25&CD69呢，还有其他一些细胞因子，也是个办法啊。
4，你用的是脾细胞，太杂了，如果做流式CFSE不可能做出经典的出峰图，有条件的话用磁珠分选，得到比较纯的t细胞，这样认可度高，结果也比较可信漂亮。如果经济拮据，直接取淋巴结，其中70%是t细胞，脾细胞只有30%，淋巴结纯系鼠可取得5*10E7个，当然这是理想状态下的得率，做流式时可标记CD3，这样结果也好些。总之，淋巴结得到的T细胞纯度，同步化程度都比脾细胞好，因无需去红，状态也要好些，此外可以减少DC的影响，结果可信。
5，纯化t细胞还有尼龙毛的方法，有文献，一些小杂志还是认可，用了尼龙毛，就是T细胞，否则你只能在文章中写淋巴细胞，但是我觉得没意义；置于台盼蓝染色，my god，老板们都觉得可靠，可能是他们追忆当年似水年华吧，我觉得根本不准，计过几块96孔板，nightmare，觉得给耍了，不建议尝试。
祝你好运。
