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标题:[求助]关于大鼠主动脉平滑肌细胞的培养

pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于大鼠主动脉平滑肌细胞的培养


我是刚开始养大鼠主动脉平滑肌细胞，参考文献当中的组织植块法，操作当中有这样几个疑问，希望能够得到各位过来人的解答，多谢！

1.关于外膜的剥离。我搜索以及看文献上的操作方法，都说是用两把眼科镊向相反的方向轻轻拉扯，呈袖套样剥离，但是我在操作过程中，剥离外膜非常困难，不知道是我找错了还是什么原因？我像是一点一点撕脱的，很薄很薄，而且撕不干净。甚至不知道到底是不是外膜，没有一个直观的认识。

2.组织剪碎以后用滴管向培养瓶或者皿里转移的时候，就又聚成团了，而且不能加培养液吹匀，铺不开，不知道会不会影响细胞的爬出。

3.我是种好以后保持组织湿润，等大概半天以后再加一些培养液进去的，贴壁也还算可以，但是做过这两次，都没有细胞爬出来。都是按照网上流传很广的植块法来操作的。现在分析不出原因，希望得到大家的指教。在此多谢了
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也要开始养平滑肌细胞了 怎么找不到一个专门的地方介绍这个技术呢 摸索啊 ~ 时间不等人哪！帮你顶
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

查了很多文章，按照上面的做，感觉应该不太难养呢，但是不知道自己操作问题出在什么地方了
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩.我也做了四次平滑肌细胞原代了,到现在也是没有养出来.
也是找不到原因.
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天第三次做，这次是从内侧开始刮，貌似中膜和外膜可以刮开，不知道自己做的是否正确，等结果吧。期待交流~~~~
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我培养的就是大鼠的血管平滑肌细胞，取材很简单的啊！一次成功。呵呵！
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
外膜用两把小镊子轻轻撕下即可。
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
外膜很薄，在肉眼直观下成白色薄膜状，半透明。在撕扯过程中可能发现有丝状物从血管伸出，但不影响外膜的剥离，耐心将外膜剥离干净即可纵向剪开血管，有材料上说用刀片轻刮掉内皮细胞，我是直接用镊子刮除的，效果也很理想，在刮除内皮细胞的同时你会发现血管平滑肌层很容易出现裂口，然后用镊子轻轻移入小瓶中冲洗后用剪刀剪成碎片，大小见有关文献。移入培养瓶，以每平方厘米3-4的密度接种。待组织块周围干固，贴壁牢固时，约4-6小时，轻轻加入20%FBS，放入培养箱培养即可。一般得一周后才能见细胞爬出。
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也问一下：
我做原代已经3次了，但是都没有长出细胞来。
我也是按照文献上的方法，剥除外膜，刮几下内膜，然后剪成很小的组织块，放在培养瓶中培养。
几天之后，组织块周围有浅黄色的片状物爬出，但是在高倍镜下看都是纤维条索状的，没有细胞结构。
怎么样才能让平滑肌细胞爬出来呢？
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-5-24 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢多谢！看来还是需要实践，我也还没有结果呢，大家的情况都差不多，革命尚未成功啊！
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