[求助]养骨髓干细胞请指教

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标题:[求助]养骨髓干细胞请指教

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发表于 2012-5-24 15:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位高手们，我养的骨髓间充质干细胞在第一次换液前生长都很正常，可换完液后，就形态发生改变，不贴壁，切培养液很清亮。请诸位高手指教，小弟不胜感激。

chao_he wrote:
> 骨髓干细胞状态好的时候半小时就能贴壁的，出现这种情况的原因可能有两个：最初分离消化的时候酶解时间太长或者是换液太早。不知有没有刚刚分出来时候的细胞照片可以传上来看看。
>
> 图片上的东东基本可以确定不是间充质干细胞(MSC),MSC在生长早期是瘦长的,梭形的
>
>
我这个细胞就是原代培养4天后，换液后看到的情况，也没用酶消化啊。刚分出来时候血细胞比较多，看不太清。可不可能是什么污染或缺少什么成分啊

附件

2012-5-24 15:00

34378991.jpg (58.54 KB)

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发表于 2012-5-24 15:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还望达人帮忙分析一下
谢谢！

附件

2012-5-24 15:01

20874640.snap.jpg (11.42 KB)

zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-5-24 15:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位高手们，我养的骨髓间充质干细胞在第一次换液前生长都很正常，可换完液后，就形态发生改变，不贴壁，切培养液很清亮。请诸位高手指教，小弟不胜感激。

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你这张图片是传代几小时后拍的？一般情况下，骨髓干细胞3小时左右就可以贴壁的，
如果你传代后过了一夜后仍然没有贴壁得考虑一下几个问题：
1传代的时候是否消化过头?
2 另外一个就是考虑污染的问题：比如操作时候，或是培养基的问题

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发表于 2012-5-24 15:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我这个细胞就是原代培养4天后，换液后看到的情况，也没用酶消化啊。刚分出来时候血细胞比较多，看不太清。可不可能是什么污染或缺少什么成分啊

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发表于 2012-5-24 15:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

刚开始情况是：开始长的很好，出现大量贴壁细胞，形态正常，可一换液就不行了，（就是普通换液，就是换掉血细胞），细胞停止生长，形态就如上图所示了。可这回更严重了，根本连贴壁的都没出现，直接就这样了。

dog002[使用道具]
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发表于 2012-5-24 15:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

估计是换液出了问题

请达人解答吧

ero11[使用道具]
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发表于 2012-5-24 15:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我这个细胞就是原代培养4天后，换液后看到的情况，也没用酶消化啊。刚分出来时候血细胞比较多，看不太清。可不可能是什么污染或缺少什么成分啊

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嗯，建议你换瓶培养基或是采取半数换液；即倒掉一部分骨髓侯，加入一部分培养基试试，
另外，我们做原代培养的时候，一般在第一次换液时，倒掉旧的培养侯，不用PBS洗，直接加入新鲜培养基，这样做的原因是怕细胞贴壁不牢固，被PBS洗掉
祝好运！

sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-5-24 15:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教一下各位高手，一般首次换液都什么时候啊

dog002[使用道具]
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发表于 2012-5-24 15:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教一下各位高手，一般首次换液都什么时候啊

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12h半量，24h半量，48h全量，72h全量，以后基本可以控制在72h全量换液，原代一周左右长满（融合率80-90%）传代，之后约每3日换液同时传代。

dog002[使用道具]
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发表于 2012-5-24 15:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

另外，传代时也要注意，胰酶消化时浓度不宜过高，文献上所说的浓度范围过于宽泛让人不好把握，一般对MSC而言，浓度在0.1-0.2%之间比较合适，太高则消化能力过强，容易伤害正常细胞；消化时间一定要尽量短，一般从20-30s到1min左右，最多不要超过2min，消化过度易伤害细胞，造成细胞老化；另外，值得一提的是消化的目的一方面是让贴壁的MSC游离下来，另一个目的是要通过此操作使得MSC得到富集和纯化，不要等到大部分甚至所有细胞都被消化下来，一般用肉眼观察应该终止消化的时机为：细胞间刚刚出现离散而未完全分离时为宜，如果等到大部分或全部细胞互相之间都分离开来再终止就已经来不及了。