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标题:[求助]复苏细胞老是第三天全死!

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2012-5-24 19:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]复苏细胞老是第三天全死!


我是一个细胞新手,最近复苏冻了半年左右的hepg2细胞,第一次按正常的程序复苏,刚开始细胞觉得好少,长得也不好,一直没有换液.可到第三天突然觉得培养液有点浑浊,细胞也有好多不见啦,只看到培养基里面突然有好多的絮状物，师兄认为是污染，所以扔了

第二次听师兄的话，没有按正常的复苏，只是解冻后直接加入培养基7ML左右，直接培养，过12小时后换液，换液时觉得细胞数量不够，但也换了，一天后又是出现相同的情况。。。。扔了

第三次，和第一次同样的方法，一开始看是在12小时以后，觉得不错，细胞数量也不少，帖壁也可以，再过12小时再看也不错，可是后来第三天看时又出现了相同的情况，我想换液算了，不知道有没有用。。。。。。。。。。。这到底怎么啦。。。。。。。。

有人说复苏后24小时内不能去动它，以免影响帖壁，

又有人说得12个小时换液，把死的细胞去掉。。。。。。。。。。

现在我全乱了，真的不知道怎么办，大家帮帮我吧！
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发表于 2012-5-24 19:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉是冻存的细胞问题
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-5-24 19:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己的感觉可能是污染了.把所有的东西都从新高压.以前我养细胞的时候也出现这样的情况
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2012-5-24 19:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢两位的回答，

也有的人说是冻存前的细胞本身就已经污染。。。。。。。。。。

对这个我也不好说，但我没有用什么要高压的东西呀，难道是培养瓶？离心管？枪头？。。。。。。。。。。可我的师兄和师姐们用同样的东西呀！！！

还有就是师兄说可能是培养基的问题，我已经用空白的培养基做了两天，没有发现任何问题！！！！真是麻烦！！！！

哦，还有一个就是师兄有一次看我的细胞说是支原体污染，如果是，哪污染来自哪里呀？我的操作，还是。。。。。。。。？
如果是，哪可以用什么方法可能好点呀。

还有一点就是我们做细胞都不用手套的，哪样是不是很危险，不过师兄和师姐都不用，我们整个实验室都不用的。。。。。。。。。。。。。习惯本来就不好的。。。。。。。。。。。

谢谢各位啦，多帮帮我吧，我老板好急我啦，真烦。。。。。。
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发表于 2012-5-24 19:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冻存前的细胞已污染！
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-24 19:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存前的细胞已污染！ 很有可能!
一般贴壁的细胞在24H后都会贴的,要是还没贴的话,那些细胞活力也已经不好了,放着意义也不大.所以一般在24H左右就可以换液.我一般都是下午复苏,明天早上换液.带不带手套问题不大,我们一般都带,关键是保护自己.
还有看看和你一起在那养细胞的人有没有出现这样的问题,有的话就休息下,大清扫一下.
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-5-24 19:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是你的细胞污染了，你看看别人的细胞有没有你这种情况，有可能是实验室都污染了。我们实验室就有这种情况。细胞贴壁以后才能换液。你把培养基换了以后还是这种情况就有可能是冻存细胞就污染了，你和别人要些养得好的细胞重新复苏看看。
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发表于 2012-5-24 19:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前也出现过和你同样的问题，我那次最后发现是用的培养液染菌。其实每次要复苏细胞之前，就要给自己营造一个好的实验环境，实验室和实验器具的灭菌工作都要认真做好，对每一个灭菌环节都不能存在侥幸心理。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2012-5-24 19:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位的回复,我现在又复苏了一管,同时做了一个空白的培养基对照看下,

我们实验室同一个培养箱里面他们的细胞正常没事,.

所以过几天可能就可以知道啦

我昨天下午复苏的,今天下午去换液,到现在一直没动

关键是死的细胞在培养基里面对还活着的细胞会不会有什么影响?

谢谢大家
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tangxin_80[使用道具]
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 小中大
现在第四次又全死,也是第三天,昨天换液时都还有细胞的,现在全部变成多角型或星型,雪花状等.............................在肉眼上可以看到培养基里面有白色絮状物,师兄师姐们都怀疑我啦,大家帮帮忙吧,他们说是支原体或衣原体,这到底该怎么办呀?
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