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标题:[求助]如何分析Annexin V的流式散点图

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发表于 2012-5-25 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]如何分析Annexin V的流式散点图


做药物干预细胞增殖的实验，用Annexin V-FITC试剂盒做流式，因为自己学校没有流式细胞仪，只能拿到外校去做，最后给了几张这样的散点图，请各位高手帮帮忙，我该如何对它进行数据分析？


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2012-5-25 11:51
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发表于 2012-5-25 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一个疑问：做流式的老师在图上标明右上象限是早期凋亡，右下象限是晚期凋亡；但试剂盒的说明书上说右上象限是secondary necrotic cells，右下象限是apoptotic cells也就是凋亡细胞；我查了查坛子里大部分都说右下是早期凋亡，右上是晚期凋亡或坏死，到底哪种对啊？搞晕了。
另外，这个secondary necrotic cells应该翻译成什么？继发坏死细胞？晚期坏死细胞？
试剂盒是Beckman Coulter公司的Annexin V-FITC。
请大家多多帮忙啊！
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发表于 2012-5-25 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

错了……是Annexin V-FITC
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发表于 2012-5-25 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外这个试剂盒做出来应该算是Annexin V/PI双染吧？
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发表于 2012-5-25 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个试剂盒是Annexin V/PI双染,那位做流式的老师给你标错了,你可以回去找他确认.如上图所示:左上象限为死亡的细胞,图旁边的数据显示,Gated%为5.19%,左下象限为阴性细胞,也就是活着的细胞,Gated%为80.85%,右上象限为晚期凋亡细胞,Gated%为10.57%,右下象限则是早期凋亡细胞,Gated%为3.38%
secondary necrotic cells应该翻译晚期坏死细胞
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发表于 2012-5-25 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚刚实验室老师终于理我了，说象限没标错，是自己机器的设定就是这样。另外还强调这个试剂盒不是AnnexinV/PI双染，说PI染色是左边象限的全部凋亡，我又糊涂了……双染到底是怎么回事啊？高人来指点指点我吧！
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发表于 2012-5-25 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你们那个实验室做流失的老师有问题吗? 你给我提供的消息是Annexin v-FITC
,既然是FITC标记的就应该是第一通道,也就是FL1, Annexin 单阳属于早期凋亡,也就是右下象限为早期凋亡, 怎么会是晚期凋亡呢?既然你用PI这个染液了,还是第二通道的(FL2),PI标记的为死亡细胞,两者双阳才是晚期凋亡,而且你的试剂盒已经注明右上象限双阳为secondary necrotic cells.这不很明白吗?
还有下次做流式的时候请上机的老师给你注明FL1-Annexin v. FL2-PI.这样你的图上才会显示出来,我在实验室给学生们做流式4年了,还从来没有人说我解释的不对.老师就是应该耐心的为学生服务解答问题!
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发表于 2012-5-25 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我太困惑了……那个老师很坚定的告诉我没标错。现在不知道该怎么处理这个数据。哭死了……
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发表于 2012-5-25 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你给我提供的消息准确,Annexin -FITC,PI-PE.我敢肯定那个老师有问题
我也是专业操作流式的
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 小中大

试剂盒是Annexin V-FITC kit，beckman coulter公司的，流式细胞仪是Becton Dickinson Facscalibour。试剂盒的说明：The ANNEXIN V-FITC kit is an apoptosis detection kit based on the binding properties of annexin V to phosphatidylserine (PS) and on the DNA-intercalating capabilities of propidium iodide (PI) .
Reagent：
1 vial annexin V-FITC ready-to-use, liquid, 100μl, containing 1mg/mL BSA
1 vial 10× concentrated binding buffer, liquid, 1.7 ml
1 vial Propidium Iodide, red powder, 205μg

这个应该是双染吧？到底哪里出问题了？如果是简单的标错，说一下就可以了，这样子我按她的说法分析数据，会不会乱了啊？
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