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标题:[求助]细胞实验问题求助

zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞实验问题求助


做一些细胞实验，但有些问题仍然不懂，请求大家帮助。。
每种细胞接板密度怎么定得？是不是以最终OD在0。3－1之间为好（MTT为例）？
为什么接板后要有些要饥饿后才能上样？

维持液是为了让细胞处于什么样一种状态？不分裂，数目不变吗？没有牛血清就可以做到这个吗？

问题挺多，渴望得到大家的回答，谢谢哈！
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞接板密度是根据实验而定，一般是１－５*１０的５次方，ＯＤ不一定在0.3－１之间为好，只有梯度能明显的看出，可以说维持液是为了让细胞不分裂，数目不变，没有血清可以做到．
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发表于 2012-5-25 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
接种密度一般按标准要求，如果没有标准就需要自己实验摸索了 。我们实验饥饿是因为实验所用细胞株对实验样品不是唯一依赖性细胞株。
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zsxan1990[使用道具]
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 小中大

细胞接板密度是根据实验而定，一般是１－５*１０的５次方，ＯＤ不一定在0.3－１之间为好，只有梯度能明显的看出，可以说维持液是为了让细胞不分裂，数目不变，没有血清可以做到．
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般是50000－100000，如果细胞分裂增值速度很快就必须低于50000。实验饥饿细胞使细胞同步化。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家的回答，不过还有些不太明白。
大家说可以不是唯一依赖性细胞株，能不能再详细一点说^_^
饥饿就可以是其同步化吗？没血清不是停止分裂吗？
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
密度该怎么确定？从哪些因素考虑？比如OD，时间之类的怎么考虑？^_^
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先调整细胞浓度２*１０的５次方／ml，接种于９６孔培养板中，每孔５０ul，３７度，５％ＣＯ2培养４０－４８小时，加入ＭＴＴ溶液，再培养４－６小时加裂解液测ＯＤ值．
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我主要是想了解为什么要接那么多密度的细胞，为了使OD在0.1-1之间吗？还是从别的因素考虑。
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loli[使用道具]
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发表于 2012-5-25 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zhenxin 于 2012-5-25 12:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我主要是想了解为什么要接那么多密度的细胞，为了使OD在0.1-1之间吗？还是从别的因素考虑。

一般96孔板内，保证每孔200ul细胞悬液。
如果你用药物刺激细胞，可每孔种4000个细胞。
OD值不是为了得到的，而是你真实测出来的，好不好

细胞计数：
2×104次方＝（四大格内细胞数/4）×10000×稀释倍数
~~~~~~~这个自己定，我给你的是以每孔4000个细胞来算的
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