细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]Annexin-V binding assays

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]Annexin-V binding assays

气泡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77464
精华 0
积分 258
帖子 236
信誉分 100
可用分 1946
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
1

发表于 2012-5-26 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]Annexin-V binding assays



如题，请问这是个什么方法啊？请指教谢谢
顶部
大尾巴[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76447
精华 0
积分 232
帖子 182
信誉分 101
可用分 1626
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
2

发表于 2012-5-26 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.
其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻 ,
Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.
这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.

Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。

PI(碘化丙啶)能进入坏死细胞与DNA结合
7-AAD也能够与坏死细胞结合.

所以,经常Annexin v 与PI 或者7-AAD 联合使用,用来标记死亡和凋亡的细胞.

一张Annexin v 结合示意图


查看积分策略说明
附件
2012-5-26 15:54
38240331.jpg (21.11 KB)
 
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
3

发表于 2012-5-26 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞凋亡很简单的做法阿，很多地方都有做得，你是哪的？我是天津的
顶部
jujuba[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79697
精华 0
积分 612
帖子 903
信誉分 100
可用分 5331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
4

发表于 2012-5-26 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有做细胞，但是看文献总遇到这样的问题，

上面讲解的很详细，我想问一下，PI 和 7-AAD染色后，是红色的吗？
再有 Annexin-V 染色好像是绿色的吧？
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2012-5-26 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V-FITC(绿色） 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
示意图见ccowboy贴
顶部
dongdongqiang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79825
精华 1
积分 473
帖子 601
信誉分 102
可用分 3821
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
6

发表于 2012-5-26 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
磷脂酰丝氨酸是PS，不是Annexin-V， 它是一种带负电的的脂质体，在正常细胞中，有一种称为翻转酶“translocase”的酶束缚在细胞膜内侧，而细胞膜表面的脂质体是电中性的。凋亡过程中，caspase3使得这个酶失活同时活化了一个叫“scramblase”的酶，因此PS自由的顺着浓度梯度运动到细胞膜外表面。Annexin-V则可以在带负电的脂质体外聚集，所以在Annexin-V可以结合到凋亡的细胞表面，而不结合到正常细胞或者由于坏死造成细胞膜崩解的细胞上。

因此Annexiv-V本身是没什么颜色的，它的颜色取决于标记的荧光。由于PI经常和Annexin-V合用，而PI本身是红色，占用流式的第二通道，所以Annexin-V上通常标记FITC，显示为绿色。但是和7-AAD联用就不一定了，既可以把7-AAD标上PE，Annexin-V标记上FITC，也可以正好反过来。
顶部
hold住[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75093
精华 0
积分 566
帖子 832
信誉分 100
可用分 4962
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
7

发表于 2012-5-26 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。
顶部
气泡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77464
精华 0
积分 258
帖子 236
信誉分 100
可用分 1946
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
8

发表于 2012-5-26 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问在BECKMAN COULTER 公司的四色的流式上，pi 占第几通道啊
顶部
pengke1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 78619
精华 0
积分 470
帖子 639
信誉分 100
可用分 3986
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-1
状态 离线
9

发表于 2012-5-26 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 气泡 于 2012-5-26 15:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问在BECKMAN COULTER 公司的四色的流式上，pi 占第几通道啊

第三通道
顶部