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标题:[求助]小鼠肺成纤维细胞培养的几个疑惑

阿k[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]小鼠肺成纤维细胞培养的几个疑惑



需要做小鼠，肺的成纤维细胞培养，试了一次，用的是胶原酶和胰酶消化法，得到的结果基本上是红细胞，我没有做灌注，是不是一定要做灌注？
在消化的过程中，有什么需要注意的吗？
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，你用的是什么公司的酶啊？浓度各是多少？我快要做小鼠肺组织的消化了，也打算用这两种酶，可以交流下啊
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october7[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
偶也要开始养了，不过是大鼠，师姐也是用大鼠养的，没有灌注，直接胰酶0.25%消化的，说用胶原酶对付成纤维太浪费了，不过好像还不错的说，都说成纤维是杂草，应该还蛮好养的吧。不过消化时间也不能太长，对细胞有损伤的，用前37度预热肯定是要做的。
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发表于 2012-5-28 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对了,红细胞太多是不是你用PBS洗肺组织的时候洗得次数不够啊,还有你小鼠是用的什么方法处死的,师姐是腹主动脉放血
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有红细胞没有关系，它不贴壁，换液体以后就没有了。
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october7[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有红细胞没有关系，它不贴壁，换液体以后就没有了。
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你消化时间多长呢？组织剪的多小再消化啊？
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外：你用什么公司的胰酶呢？因为不同公司生产的酶效价好像不同的说~
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october7[使用道具]
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发表于 2012-5-28 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
师姐用的GIBCO的酶，消化30min，消化时间掌握主要看消化的情况定吧，组织一般不都需要剪成1mm3么。
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october7[使用道具]
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 小中大
对了，继续帮问，有人成纤维做过流式的么，怎么对照的细胞凋亡率会大于50％呢，是细胞本身衰老了，还是处理的问题?
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