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标题:[求助]细胞培养后有小黑点，贴壁，低倍镜可见

969[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞培养后有小黑点，贴壁，低倍镜可见



细胞内有很多小黑点，贴壁的，在低倍镜就可以看见
不会动的，感觉也没有增持现象，我把培养过的培养基倒到另一个瓶子，发现这些黑点没有增值。新培养基培养，没有这种小黑点。
细胞碎片明显增多，只要一天就可以看见有很多细胞碎片
求高手指点迷津
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
黑点不动，且没有增加，可能是细胞碎片，是由于你的细胞生长状态不好所致吗？
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也出现过这种情况，而且我是同时培养转染细胞和未转染的细胞，转染的细胞状态一直很好，而未转染的细胞则消化完后就出现许多小黑点，就是细胞碎片明显增多，接下来，细胞状态就越来越差，直至死亡。但如果每天坚持换液的话，可以暂时维持细胞的存活，但生长速度则极为缓慢。请教哪位高手遇到过类似的情况可以指点一二？这个有没有可能是支原体污染？但为什么两种细胞是同样的操作却出现如此不同的结果呢？万分感谢！
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也出现过这种情况，而且我是同时培养转染细胞和未转染的细胞，转染的细胞状态一直很好，而未转染的细胞则消化完后就出现许多小黑点，就是细胞碎片明显增多，接下来，细胞状态就越来越差，直至死亡。但如果每天坚持换液的话，可以暂时维持细胞的存活，但生长速度则极为缓慢。请教哪位高手遇到过类似的情况可以指点一二？这个有没有可能是支原体污染？但为什么两种细胞是同样的操作却出现如此不同的结果呢？万分感谢！

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你遇到的情况应该是支原体污染，两种细胞是同样的操作却出现如此不同的结果，排除培养液的问题，可能在你做未转染细胞的操作时发生污染。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据你所描述的情况,应该不是污染.那么就可能有三种原因:1.血清灭活不彻底所致的一些蛋白分子;2.细胞生长过程中分泌的东西.3.传代细胞时,消化过重产生的细胞碎片.建议楼主自己根据实际情况,进行排查.个人意见:如果不影响细胞生长,且这种东西也没有疯狂增长的趋势,可以不用管它.
以上为一己之见啊!仅供参考.
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969[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位意见
我现在也是暂时不管它
然后往下做实验
但是总是心里不踏实
怕做出来的结果假阳性

我个人比较怀疑是细胞分泌的东西
我们实验室血清一直是直接从四季青买的
直接用，不灭活，以前好像没有出现这个情况。

细胞碎片可能性比较小吧，碎片应该是悬浮的，不可能贴壁的吧，不知道是不是这个样子的？
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发表于 2012-5-29 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞碎片也有可能是贴到壁上的，不过个人感觉还是污染的可能性比较大。前一段时间养SP2 /0细胞也是，培养液里老是出现小黑点，而且细胞状态很不好，总是漂了很多，师兄说可能是血清的事，后来血清灭活也没有大的区别。一些污染是这样的，微生物会合细胞竞争营养物质，当细胞状态好的时候，它们增殖很慢，一般不明显，一旦细胞不能及时换液，它们就开始有机可趁，细胞大量死亡，会有很多碎片，不知道这是不是传说中的黑胶虫？！不过可能真的会影响实验结果的，所以如果条件允许的话还是建议重做。
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的是不是四季青的新生牛血清，批号是多少？
我最近养的细胞也是这样，小黑点很多，大部分感觉是黏附在细胞膜上，而且细胞生长特别缓慢，如果一直养下去，细胞就开始死亡，我本人感觉是血清的问题，目前正和杭州四季青公司联系。
我用的批号是070324
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的实验中也出现好多黑点,常做布朗运动
细胞因之死亡
大家有什么好的办法没有啊?
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-5-29 12:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有一个可能 细胞老化的一个表现 或者你没有及时换液也有可能
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