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标题:[求助]如何测定细胞的转染率

8princess8[使用道具]
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[求助]如何测定细胞的转染率



我现在在做真核质粒的细胞转染,很想知道如何才能测定细胞的转染率,希望各位大侠给予指点,在此先谢了!
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xueyouzhang[使用道具]
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未见转染率测定,只有转化率测定。
转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
建议用G418筛选,挑取单克隆,扩大培养得到转染质粒的稳定细胞系
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8princess8[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 xueyouzhang 于 2012-5-29 12:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

未见转染率测定,只有转化率测定。
转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
建议用G418筛选,挑取单克隆,扩大培养得到转染质粒的稳定细胞系 ...

那转化率如何测定?谢谢你的答复!
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S6044[使用道具]
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胡说,当然有转染率!
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BOSS2011[使用道具]
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以腺病毒为载体转染细胞,可用X-gal染色鉴定转导效率:
(1)标本的制备:将适当数量的目的细胞接种于灭菌盖玻片上,5% CO2,37℃,孵育12小时;按MOI=100加AdCMV-βgal病毒提取液,孵育24小时;鼠脑标本则采用冰冻切片。

(2)X-gal染色:将标本立即放入固定液(2%甲醛,0.2%戊二醛溶于1×PBS中)中固定5分钟,去离子水洗1分钟;室温晾干,1×PBS洗5分钟;加X-gal显色底物(1mg/ml X-gal, 5mM 铁氰酸三钾,5mM 铁氰酸四钾,2mM 氯化镁溶于1×PBS),避光37℃孵育30分钟-24小时(每2小时取出观察染色情况);染色满意后以1×PBS洗5分钟,去离子水洗2分钟×2;以核固红染核3分钟,封片。

如果是GFP或EGFP标记的质粒,直接计数荧光阳性细胞数就可以了。
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但我做的是真核质粒的细胞转染,况且是不带GFP或EGFP标记的质粒,那该如何测呀,谢谢!
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酶切和连接.
标记细胞或逆转录.
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8princess8[使用道具]
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有没有用免疫组化方面的方法呀?请各位高手多多指点!
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KGZ564[使用道具]
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9
 
这样的话可能只能用细胞免疫化学的方法来测定了。
需要补充的就是用荧光染料核染以计数细胞量。
希望对你的实验有所帮助。
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wsll[使用道具]
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免疫组织化学检测转染效率?荧光标记,或G418最好

我想,是不是以一定细胞中含有该蛋白的细胞百分比表示啊,我开始做试验的时候也是这么想的。

瞬时效率是很低的,10-20%左右。免疫组织化学法感觉不敏感,没见过文献。
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