小中大以腺病毒为载体转染细胞,可用X-gal染色鉴定转导效率:
(1)标本的制备:将适当数量的目的细胞接种于灭菌盖玻片上,5% CO2,37℃,孵育12小时;按MOI=100加AdCMV-βgal病毒提取液,孵育24小时;鼠脑标本则采用冰冻切片。
(2)X-gal染色:将标本立即放入固定液(2%甲醛,0.2%戊二醛溶于1×PBS中)中固定5分钟,去离子水洗1分钟;室温晾干,1×PBS洗5分钟;加X-gal显色底物(1mg/ml X-gal, 5mM 铁氰酸三钾,5mM 铁氰酸四钾,2mM 氯化镁溶于1×PBS),避光37℃孵育30分钟-24小时(每2小时取出观察染色情况);染色满意后以1×PBS洗5分钟,去离子水洗2分钟×2;以核固红染核3分钟,封片。
如果是GFP或EGFP标记的质粒,直接计数荧光阳性细胞数就可以了。