[求助]细胞转染

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标题:[求助]细胞转染

xyw5[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们正在做的是卵巢癌细胞SKOV3细胞株的转染，用的是脂质体2000做转染试剂，脂质体2000与质粒之比为：2ul:3ul;严格按照实验操作步骤进行，转染后24小时在荧光显微镜下观察，发现荧光很少，整个视野几乎见不到荧光，48小时后再次看仍然见不到荧光。3个月前我们进行过相同的操作，转染后24小时在荧光显微镜下观察，整个视野几乎遍布荧光，证明转染效果可以。本人查了一些相关资料，说明卵巢癌细胞SKOV3细胞株的转染效果一般在70-80%左右。现在本人很迷惑，不知那步出了错误，请各位高手指点！

831226[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果确定操作上无不同的话，那么，细胞的状态好不好？细胞的状态好坏与否在实验中是至关重要的。
另外，你的质粒是如何保存的？扩增过吗？是否扩增后有突变？

gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

脂质体管子有没有放到冰上过？

qhyu[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞状态在转染前很好，密度也均匀适中。我的质粒是经过扩增了的，一直都保存在-20度，至于是否有突变不是很清楚；在操作过程中脂质体管子是没有放到冰上过，是放在室温下的。脂质体管子放到冰上过对结果有非常重要的影响吗？

gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

脂质体千万不要放在冰上，如果每次转染脂质体都放在冰上一段时间，3个月是足够让它完全失效的了
我们组里买的脂质体原来从冰箱里拿出来的时候，每次都放在冰上拿到细胞间，过了一个月，我发现转不进去质粒了，找了很多原因，最后发现是因为脂质体在冰上放置的影响。
1个月的时间，只是拿出脂质体时在冰上放置的时间，就足够让脂质体转染效率下降10倍了，我自己测过，这个10不是虚数。

所以你问一问你们组别的人在转染的时候有没有这么干过，我就是被同组的人拖累的……

qhyu[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我问了都没有把脂质体放在冰上，大家转染时都放在室温的。你也在做相关实验吗？交流交流！

qhyu[使用道具]
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发表于 2012-5-29 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢你的回答！我现在在做转染，感觉很郁闷：想必你也做过相关课题，能否分享一下你的经验？不胜感激！

zhenxin[使用道具]
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