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标题:[求助]六孔板为什么中间密集

生物迷[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]六孔板为什么中间密集



我把几个培养瓶上的细胞消化后，接种到6孔板上面，但是发现这次接种以后，每个孔的中间总是细胞密度比较大，很明显的还可以看到有叠加层次生长的现象。我记得接种的时候是均匀的加细胞的阿，而且加完了以后还把整块板晃了晃，想让它混匀点。上周接种6孔板的时候也是这样做的，没有发生这样的情况。不知道怎么会长成这样？这样的细胞密度，对后面提取RNA做RT-PCR有没有影响呢？
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vera+[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也有过这样的情况
我的经验是把细胞均匀铺种到板子里后，在显微镜下观察时不要反复旋动调节上下左右的旋钮，观察两个视野OK就行了。另外千万不要晃，晃动时形成的小小涡流易使细胞聚集到中央。当然在移动培养板的时候也要平稳匀速。如果以上种种方法还不奏效，那么把细胞种希一点
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的經驗是細胞種入6孔板後用吸管再上下吹打幾次 因為板底不是絕對平的 而是帶點弧度的 當然種稀點可能較佳 祝您實驗順利
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在六孔板中注入细胞后就静置10分钟左右，然后立即放入培养箱中，不要反复观察接种情况，只要尽量避免接种细胞后晃动六孔板就可以避免细胞接种不均的情况。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你加入的培养基是不是太多了？六孔板的面积比较大，如果培养基太多的话任何一点小的晃动都严重地扰乱细胞的分布，导致细胞聚集在一起。试试把培养基控制在1.5-2ml，充分地晃匀后放入培养箱，细胞帖壁后再看。
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么我晃了以后,就长在外围了,而中间比较少,感觉离心力是向外的
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

接种后，可以在放入培养箱之前，上、下、左、右幌动一下后，平平的放入培养箱中。
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-5-29 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的经验是种前首先要离心使细胞均匀，接种后再吹打。
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-5-29 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题我以前做实验也曾经遇到过：当时也是很小心的将细胞吹打均匀，小心翼翼的将细胞放在培养箱里，还是经常出现向中间集中，后来发现：原来实验室里大家经常去开培养箱的门，导致我的细胞在贴壁之前在培养箱里晃来晃去，向中间集中。真是晕啊，只好将早晨的工作调整到晚上来做，人少一些。
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-5-29 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种现象很常见，不仅6孔板接种细胞会出现这种现象，24孔板、不同直径的培养皿等圆形培养器皿养细胞都会出现细胞在中间聚集的现象。其形成的主要原因是拿器皿晃动时形成的涡流使细胞聚集到中央。解决这个问题方法的核心是：水平“十”晃动圆形培养器皿。具体做法是：细胞接种后，将培养器皿静置或直接放在倒置显微镜的载物台子上静置，几分钟后，待细胞沉降到培养器皿的底部后，在镜下观察细胞密度，如觉得密度合适，将培养器皿水平“十”晃动几次，直接放入培养箱（切勿在水平“十”晃动后，再次拿到显微镜下观察，因为镜下观察时形成的微小晃动又使细胞聚集到中央）。
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