细胞世界

人脐静脉内皮细胞我们这有，但是不建议你买，你买过去也只能传几代就不能用了，最好是自己原代培养。

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不知道你养的是EVC-304,还是HUVEC。感觉提到人脐静脉内皮细胞要说明到底是EVC-304,还是HUVEC。不能混在一起说。我经常看到有人说同样的话，我很奇怪的。

首先，EVC-304现在认为是不能当人脐静脉内皮细胞用的，也就是说如果你养的是EVC-304，那么不能说人脐静脉内皮细胞怎么样，只能说EVC-304怎么样。

我养了挺长时间的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)，我是买的细胞株。现在都13代了。我冻存的是3－5代。一直以来细胞长的都很好呀。有人说什么长到第7代就不行了，就长角了，我不知道这结论是怎么得出的呢？还有人说HUVEC只能用DMEM养，还要加生长因子。我用的是1640＋10％胎牛血清，没加生长因子，长的真的挺好的。不知道大家说HUVCE传几代就不行了的说法，从何而来，希望大家多多交流。多多指教！

我养的HUVEC

不知道你养的是EVC-304,还是HUVEC。感觉提到人脐静脉内皮细胞要说明到底是EVC-304,还是HUVEC。不能混在一起说。我经常看到有人说同样的话，我很奇怪的。

首先，EVC-304现在认为是不能当人脐静脉内皮细胞用的，也就是说如果你养的是EVC-304，那么不能说人脐静脉内皮细胞怎么样，只能说EVC-304怎么样。

我养了挺长时间的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)，现在都13代了。我冻存的是3－5代。一直以来细胞长的都很好呀。有人说什么长到第7代就不行了，就长角了，我不知道这结论是怎么得出的呢？还有人说HUVEC只能用DMEM养，还要加生长因子。我用的是1640，没加生长因子，长的真的挺好的。不知道大家说HUVCE传几代就不行了的说法，从何而来，希望大家多多交流。多多指教！

我养的HUVEC

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请问一根10cm长的脐带一般传到第3代时，能收获多少个细胞呢？我的用量很大，不知道一根够不够用。请指教！
我现在已经准备原代培养，我买了M199液体培养基，Gibco胎牛血清，VEGF，明胶，青霉素，链霉素，L-谷氨酰胺，D-hanks液。请问：
1。从医院手术室取脐带怎样才能最方便又无菌呢？
2。原代培养的时候重点需要注意些什么呢？
谢谢！

HUVEC原代分离的细胞数量主要与你的操作有关。
分离的时候注意要把血液冲洗干净，并保证胰酶（胶原酶也可以，但要适当延长消化时间）充分的消化，但又不消化过头。我们实验室的经验是用胰酶37度消化10分钟，用手轻揉脐带，使细胞脱落至消化液。
基本上操作得当的话，10cm的脐带消化下来的huvec有10的5次方，4～5天就差不多长满可以传代了。
取脐带的话，你买一瓶D-hanks液，加好双抗之后，封口，放在冰袋中拿到医院，交代护士做完手术剪一段直接放到瓶子里面就可以了。因为有双抗，所以不会那么容易染菌
记得dxy有很多关于这方面的经验总结，建议lz版面搜索一下，应该会跟我当初一样受益匪浅的。

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请问一根10cm长的脐带一般传到第3代时，能收获多少个细胞呢？我的用量很大，不知道一根够不够用。请指教！
我现在已经准备原代培养，我买了M199液体培养基，Gibco胎牛血清，VEGF，明胶，青霉素，链霉素，L-谷氨酰胺，D-hanks液。请问：
1。从医院手术室取脐带怎样才能最方便又无菌呢？
2。原代培养的时候重点需要注意些什么呢？
谢谢！

我刚刚做了3根脐带，第二根和第三根成功了，但是细胞数量还是很少，20cm长的脐带收获的细胞估计只有10的4次方左右，不知道怎么样提高细胞的收获率。我用的是0.25%的胰酶和0.1%胶原酶1：1混合后注入脐静脉，将脐带整个（除去两端）浸泡入无菌的37度的温水中，控制好温度和时间，不断揉搓，但是还是很少。
请教高手，如何才能提高收获的细胞数量，我的实验每次都需要很多细胞阿。。。

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HUVEC原代分离的细胞数量主要与你的操作有关。
分离的时候注意要把血液冲洗干净，并保证胰酶（胶原酶也可以，但要适当延长消化时间）充分的消化，但又不消化过头。我们实验室的经验是用胰酶37度消化10分钟，用手轻揉脐带，使细胞脱落至消化液。
基本上操作得当的话，10cm的脐带消化下来的huvec有10的5次方，4～5天就差不多长满可以传代了。
取脐带的话，你买一瓶D-hanks液，加好双抗之后，封口，放在冰袋中拿到医院，交代护士做完手术剪一段直接放到瓶子里面就可以了。因为有双抗，所以不会那么容易染菌