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1有限稀释法
有限稀释法采用梯度倍数稀释的原则.将细胞悬液连续倍数
稀释至极低密度。然后接种于微孔培养板.培养一定时问后。微孔
中可出现单个细胞克隆.本法不需特殊设备。操作简单、快速。适合
大批员克隆化培养.是日前最常广泛的一种方法。现已广一泛用于异质
性细胞系的克隆化培养，诱导和分离耐药性或高转移性或突变细
胞株以及单克隆抗体杂交瘤细胞株，
B。l用品]
(l)培养基、血清(例如含10-20%胎牛血清的RPMI 1 640。
培养液)、0.25%胰蛋白醛
(2)离心管、吸管、计数板、移液器及加样滴头、96孔培养板、
24孔培养板、培养瓶
C 步骤，
1)取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶消化，待细胞收
缩变圆，用吸管吹打，制成单个细胞悬液.
2)取少量细胞悬液，用台盼蓝染色并计数活细胞。
3)将细胞悬液移至刻度离心管中连续倍数稀释。例如，先制
备5000细胞悬液，将此细胞悬液经100倍稀释，即为50细胞/
ml;再将50细胞/ml的细胞悬液经5倍稀释。即为10细胞/ml ,最
后将该细袍悬液经2倍稀释，即为5细胞/ml
4将3种稀释好的细胞悬液分制接种于96孔板中。每孔加
液0.1ml然后，放入培养箱内培养;
C })次日，在倒置显徽镜下观察培养板各孔细胞数，挑选只含
一个细胞的孔，做好标记并补加0.1ml培养掖，继续培养。
C}}培养期间，视培养液pH值的变化，决定是否更换培养
液。细胞堵养一周左右，孔中即形成较大克隆。待克隆长至孔底面
积的1/3-1/2时，用消化法分离克隆细胞，转种于24孔培养板扩
大培养。
