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标题:[求助]请问原代心肌细胞培养消化过程 成纤维细胞与...

tangxin_80[使用道具]
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[求助]请问原代心肌细胞培养消化过程 成纤维细胞与...



我们做的心肌原代培养 消化后染色发现细胞数不少, 但是第二天观察发现细胞贴壁的 不像是心肌细胞 ,怀疑是成纤维细胞,由于是新手不懂辨别,请高手指点, 在消化过程中成纤维细胞和心肌细胞是同步消化下来的吗,
还是现实纤维细胞,我们怀疑是因为消化不到位。 谢谢!
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xyw5[使用道具]
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小弟,你这个都不了解怎么做呢?还是看看我得毕业论文先啊!
其实你消化心肌组织的时候,心肌细胞(包括卫星细胞)、成纤维细胞等细胞都消化下来了,消化产物的最后肯定包含大量心肌细胞、一定量的成纤维细胞以及少量的其他细胞。的如果你仅仅想培养心肌细胞,这个时候分离成纤维细胞等杂质细胞就在你的试验中非常重要了。成纤维细胞的贴壁能力很强,而心肌细胞(包括卫星细胞)的贴壁能力就比较差了,所以你培养的细胞里面大部分贴壁的肯定都是成纤维细胞,所以你所怀疑的问题是确实对的,的确是大量的成纤维细胞,而且成纤维细胞的增殖能力特别强,不出多久,你所培养的细胞里面几乎全部是成纤维细胞了。
所以我给你一个建议,多查查资料,怎么分离其他杂质细胞从而得到试验的最好结果那才是最重要的,多想想试验,设计好了再做,免得走很多弯路啊。
看你做试验需要心肌细胞的纯度了,根据纯度不同,我知道大概有一下几种方法可以达到分离的目的:
差速贴壁法(所获得的纯度不怎么高)
密度梯度离心法(包括很多种,有试剂盒卖,分离效果比较好,推荐你使用)
流式细胞仪法(只能获得少量高纯度的细胞哦)
等等......
仅仅靠酶消化是达不到纯化分离的目的的
你还是多看点资料再说吧。
祝好运!
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tangxin_80[使用道具]
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楼上的  首先谢谢你 不过可能是我说得不详细,我们是 第二天, 也就是 差速离心后 发现 大量的类似成纤维细胞。 真是不好意思,我确实对细胞不怎么了解,刚开始做。 其实我那天看到的是 大量的细菌, 因为今天发现是染菌了。 可能那天因为 细菌的原因 造成 心肌细胞不能生长,贴壁。
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fsdd817[使用道具]
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晕,做原代很容易污染的拉,注意操作哦!
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zsxan1990[使用道具]
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有人说加入碘酸钠可以抑制成纤维细胞的生长,但我不知道具体的量,有大虾知道吗?
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u234[使用道具]
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我也是刚做的,第2天和你有同样的困惑,看到的感觉也都是成纤维细胞,但不要着急,心肌细胞开始和成纤维细胞很象,养2天就看出来了,基本上都是心肌细胞。建议加5-Brdu,效果很好。
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sunnyB[使用道具]
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以下是我的经验:
1 不波动情况下:
细胞变形的话.,,一般情况下,,成纤维属于细长,或者是长方形,颜色浅些,而心肌则中间特别鼓,像肌肉一样。。中间很鼓,饱满,并且就聚集生长的趋势

2 搏动
只心肌搏动
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yychen[使用道具]
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根据我的经验:
1、差速贴壁2h
2、加5-BrDU
完全可以满足试验要求!
一定要两个操作一起用!
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owanaka[使用道具]
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大部分心肌细胞要搏动
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