[求助]细胞消化时胰酶不弃去对细胞的影响

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标题:[求助]细胞消化时胰酶不弃去对细胞的影响

whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-5-30 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位前辈：
我在做细胞传代时，偶尔消化稍微有点过时就直接把培养液加上了，后来发现对细胞影响不大。但是又觉得这似乎不大合理。哪位高手给指点一下！
谢谢！！

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-5-30 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

试过，其实没多大影响，细胞照样长得好好的！其实只要含血清的培养基加了，中和了胰酶，细胞就处于很安全的环境中了！

whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-5-30 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

哦我传的细胞也没有明显的影响，但是如果没有影响的话，为什么参考书上要求吸出胰酶呢!
总之，还是很谢谢你！！

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-5-30 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这样的处理方式应该是没有什么问题的，但前提是你所用的消化液中只含有胰酶，而不含有EDTA。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、
Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要彻底清洗，否则细胞易脱壁。因为胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。
配制胰酶的溶液常用D-hank's或PBS，这些平衡盐溶液中的成分在培养基里都有，所以只要血清将胰酶的作用中和了就不会有什么影响的。

多多交流！

DDD[使用道具]
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发表于 2012-5-30 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

根据我的经验，细胞用胰酶消化后，直接加培养基中和就可以了，一般对细胞不会有影响。但是为了消除EDTA的影响，可以在第二天更换一次培养基，这样既可以清除消化液的影响，又可以将杂质和未贴壁的细胞去除。

one[使用道具]
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发表于 2012-5-30 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该是没关系的，我做的也是少量胰酶（不含EDTA）消化后，直接加培养液终止的，培养液中的血清就能终止酶的作用，细胞的长势还是可以的。

toy[使用道具]
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