[求助]永生化细胞的检测方法？

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]永生化细胞的检测方法？

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]永生化细胞的检测方法？

分子式[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76128
精华 0
积分 242
帖子 223
信誉分 100
可用分 1876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2012-5-30 15:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在用端粒酶构建细胞永生化，想问问大家在Ｇ４１８筛选后，如何鉴定细胞是永生化的啊？谢谢．

HP007[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74166
精华 0
积分 446
帖子 612
信誉分 100
可用分 3833
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2012-5-30 15:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

传代超过60次，体外培养1年。

BUK[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74485
精华 0
积分 521
帖子 701
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态离线

发表于 2012-5-30 15:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

敢不敢问你的质粒的情况呀？
我也在做永生系中……

分子式[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76128
精华 0
积分 242
帖子 223
信誉分 100
可用分 1876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2012-5-30 15:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的是逆转录病毒载体　　你呢？

BUK[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74485
精华 0
积分 521
帖子 701
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态离线

发表于 2012-5-30 15:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的是携带HTERT启动子的质粒，可是效果不是太好
准备找一下带sv40的大T抗原的载体，你的实验怎样，转染的效果好不？
传了几代了？
祝试验顺利呀

vera+[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2012-5-30 15:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我得实验是用hTERT逆转录病毒转染间质干细胞，可是转染后传至11代细胞状态就不好了，空质粒组也不好，想请大家给些建议！
在鉴定上我用的是TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性，可是PCR产物用琼脂糖电泳未见任何条带，有没人做过这种方法，给些经验吧
非常感谢！

wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态离线

发表于 2012-5-30 15:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知道楼上将ＴＥＲＴ转入ＭＳＣ后，要做什么啊？

vera+[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2012-5-30 15:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的实验是转染后建永生化细胞系,可目前试验失败呀,尤其是TRAP-ELISA做不好,能否帮忙指点了?非常感谢!

分子式[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76128
精华 0
积分 242
帖子 223
信誉分 100
可用分 1876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2012-5-30 15:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用什么转染啊？是病毒还是脂质体啊？

vera+[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2012-5-30 15:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

脂质体2000，换了一个质粒呀，希望会好起来