[讨论帖]实验室警示

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标题:[讨论帖]实验室警示

一叶[使用道具]
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发表于 2012-5-30 15:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【1】不懂的时候一定要问，不要不好意思。有一同学，晚上加点做试验，当把要冻存的东西放入－70度冰箱时，发现冰箱在报警（后来估计可能是冰箱内霜较多了，需要除霜了），这个同学估计当时也挺着急的，就想了一个办法，把电源给拔了，当然冰箱是不响了，结果大家都知道了，很多人放在冰箱内的东西（当然也包括他自己的）都废了。

【2】细胞培养时一定要注意细胞的密度，特别是原代培养的细胞不容易获得时。我原代培养大鼠的肺泡巨噬细胞，从每只大鼠上提取的巨噬细胞放到六孔板上，结果发现细胞生长的很慢，包括换培养液、增加胎牛血清的浓度等很多办法都用了，结果也不理想。后来换成了12孔板就好了，考虑开始是因为细胞的密度太小引起的。

【3】从培养箱内取东西前手一定要喷酒精，动作要快，可以先看好了，要取的东西在那里，然后快取。显微镜下观看细胞时间也不要过久，否则会对细胞有不利影响。

【4】培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。换水前要用百分之75酒精消毒。水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。

一叶[使用道具]
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发表于 2012-5-30 15:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【5】用离心法提取细胞时的转速不要超过1000转/分钟（尽管多文献上都大于这个数值），时间一般不超过10分钟，否则会造成细胞活力下降或者死亡。我有一次分离大鼠肺泡巨噬细胞时，用的是3000转/分钟，离心10分钟，结果细胞没死，但是细胞的活力下降，很不容易生长。

【6】在往液氮罐里放东西的时候，很多人都用纱布缝一个布袋，用绳子扎口，把要冻存的冻存管和组织什么的放到纱布袋里然后放入液氮罐里，绳子在外边，这个方法很好。但缝纱布袋的时候一定要注意，不要缝的过大，也不要缝成正方形。因为当里面放的东西比较多的时候，而布袋的宽度又比较大，在液氮里，就会变硬了，用的时候，很有可能就拉不出来了。

【7】当要还给别人液氮罐或者想把液氮罐里的液氮倒空时，一定要把液氮倒入其他的液氮罐。千万不要倒入下水道。我有一次就是把液氮倒入了下水道，结果下水道下面的塑料接口断了，而且液氮使水结成冰后，还会使液体向上溅，很危险的。

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养基的选择：
（1）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献，或在购买细胞株时咨询。
（2）本单位惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。
（3）根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640；进行细胞杂交、基因转移实验，可选择IMDM。
（4）用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

无菌操作基本技术：
1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。

any333[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养基在使用过程中应注意的问题：
（1）培养基在使用前需37 度预热或在室温平衡后再使用。
（2）细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。
（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。
（4）避免液体间、细胞间的交叉污染。
（5）配制完全培养基时，配制的量最好在2周内用完为好

在超净台里操作要注意：
（1）在超净台里操作时，注意手不要跨越无菌区，以免造成污染；
（2）刚刚喷了酒精拿进超净台的器皿切勿立即在酒精灯上灼烧，要等喷的酒精差不多挥发干了在行灼烧；
（3）超净台的挡风玻璃最好不要用酒精擦拭，因为有一种好像是有机塑料的挡风玻璃在被酒精擦拭过多次后会变得很模糊，将影响以后的使用。

乌贼老弟[使用道具]
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小中大

离心机使用注意事项：
1、离心机套管底部要垫棉花或试管垫。
2、离心刚从水温箱内取出的样本管时，应经常观察离心杯内是否有积水并及时倾倒，以保持离心杯的干燥和离心时的平衡。
3、离心机严禁不加转头空转，如空转会导致离心机轴弯。
4、使用时对负载必须平衡，防止机身振动，若只有一支样品管另外一支要用等质量的水代替。要不然离心机长时间处于非对称放置，对离心机磨损破坏很严重。
5、启动离心机时，应盖上离心机顶盖后，方可慢慢启动。
6、使用时如发现声音不正常，立即停机。
7、有的普通离心机带有离心管套筒，平衡时应带上管套筒，一台离心机的套筒只能在该离心机上使用，不能在离心机之间(特别是不同型号的离心机之间)混用套筒。
8、分离结束后，等离心机停止转动后，方可打开离心机盖，取出样品，不可用外力强制其停止运动。

bananapeople[使用道具]
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小中大

超净台：
1. 操作时不注意风向，有的垂直于台面向下吹，在操作中培养瓶或者培养液竖直放着在，瓶口打开稍久；有的是平行于台面从内向外吹，培养瓶瓶口打开朝内侧平放，如果超净台未擦洗干净，细菌极易污染瓶里。操作中应注意风向，避免瓶口与风向相对打开。
2. 清洗超净台，里面的滤风的隔板有时疏于擦洗，因容易积垢而造成污染。
3. 超净台刚买回时，里面不干净，开始操作不要在紫外消毒后，立即使用抽风机，应里外用酒精、新洁尔灭等清洗干净，自然干，紫外照射后再使用。

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小中大

培养箱：
1. 在公共实验室有一个较普遍和容易犯的毛病：做完课题后没有把剩余的试剂及样品处理掉，一方面占了较多空间，另一方面容易造成污染。我所在的细胞培养室发生过两次这种情况，因条件所限，原代培养和传代培养放在一个培养箱，半年前有人做完原代培养留下的培养瓶没丢，几个人的细胞都同时发生污染，查到最后是培养箱的问题，清理出原代培养瓶，问所有人才知道是这么回事，气啊！
2. 原代和传代细胞应该分开放在两个培养箱中，如果有条件最好划分出原代培养室和传代培养室。
3. 培养箱最好一个月清洁一次，新洁尔灭、75%酒精擦洗，再用紫外消毒，切莫偷懒，我们就是吃了偷懒的大亏。

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发表于 2012-5-30 16:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对于移液枪的正确使用方法及其一些细节操作，是很多人都会忽略的。现在分几个方面详细叙述。
1 .量程的调节
在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。

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发表于 2012-5-30 16:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

移液枪的正确使用：2.枪头的装配
在将枪头套上移液枪时，很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这是错误的做法，这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。如果是多道（移液枪，则可以将移液枪的第一道对准第一个枪头，然后倾斜地插入，往前后方向摇动即可卡紧。枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。

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