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标题:[求助]用流式细胞术测大鼠神经细胞凋亡！

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发表于 2012-5-30 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]用流式细胞术测大鼠神经细胞凋亡！



大家好！我现在想测大鼠脑组织的细胞凋亡情况，看了些资料，想用Annexin V凋亡试剂盒检测，但很多都是用于人和小鼠的，不知道可以用于大鼠不？
另外我是取新鲜组织制成单细胞悬液，我看有些说明书里要用70％的乙醇固定，不知道用Annexin V凋亡试剂盒检测是要求用活细胞还是死细胞，两者的方法上有什么区别？对结果有什么影响？
我现在很着急，又找不到有关的老师请教，请各位高手前辈指教，不胜感激！
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发表于 2012-5-30 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好！我现在想测大鼠脑组织的细胞凋亡情况，看了些资料，想用Annexin V凋亡试剂盒检测，但很多都是用于人和小鼠的，不知道可以用于大鼠不？
可以
70％乙醇固定常在测周期时用,如需固定可用1%多聚甲醛
用活细胞的效果好些
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

强烈不建议神经元的凋亡检测上流式。
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发表于 2012-5-30 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家的帮助，我也不想做流式，但老板要求做我也没有办法，和老板沟通不了，唉！不过gzgygy为什么强烈不建议神经元的凋亡检测上流式呢？有什么原因吗？
我还有一个问题，我看资料上有用很多方法，对于用细胞周期法检测细胞凋亡和用Annexin V来检测细胞凋亡这两种方法哪一种更好些啊？
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发表于 2012-5-30 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要想测凋亡还是用ANNEXINV ,他对凋亡的检测比较直观，准确，用周期法测凋亡不太敏感，因为它主要还是测细胞周期的，得到的凋亡百分率也不太精确，个人建议用ANNEXIN V，可以看到早期凋亡和晚期凋亡
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发表于 2012-5-30 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！我看的资料说的是ANNEXIN V测早期凋亡，周期法测晚期凋亡。
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发表于 2012-5-30 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ANNEXINV/PI双染可以区分凋亡细胞，死细胞和活细胞。
神经元的细胞为啥不能上流式？只要符合单个细胞而且可以被荧光染色应该就可以上流式吧！
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发表于 2012-5-30 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、如果要用ANNEXINV/PI检测早期凋亡当然不能固定，固定了细胞就死了，我们都用固定的细胞作阳性对照的。
2、目前任何实体组织（脾脏、骨髓、血液或其他体液之外的）分离的细胞做ANNEXINV/PI流式检测，其结果都存在不确定性。首先，细胞分离过程的损伤是很大的，造成人为的假阳性；其次，混杂细胞种类太多，细胞分布很弥散，很难区分细胞群。总之，做之前先要有思想准备，失败的可能性很大
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发表于 2012-5-30 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ANNEXINV/PI检测凋亡不能固定
这种方法要用活细胞检测
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jkobn[使用道具]
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 小中大
理论上说神经元细胞是可以AV/PI测凋亡，但我们实验室曾经有人做过神经元细胞凋亡，但是由于神经元细胞生长需要在培养板上涂多聚赖氨酸，细部贴壁很紧，消化过程 掌握不好，消化得到的细胞数量很少，我上样的时候每秒钟只有10来个细胞，一个样跑到10000个都很困难，细胞状态也不好，试验结果并不理想，像laugh所说细胞分离过程很容易引人假阳性，真要做的话细胞处理过程一定要小心。
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