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标题:[求助]DMEM培养基调节ph -hepes加好多？

kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]DMEM培养基调节ph -hepes加好多？



我在做乳鼠心肌细胞培养 的，发现DMEM培养基好容易变碱，刚拿出来的培养基没用几次就变得紫红的，一测ph 多变得好碱的 影响原代细胞贴壁。我打算加点hepes 来调节ph , 我是Gibco的DMEM－H 加了3.7 克naco3,要加hepes 的话.不知道1000 ml要加好多克啊。请各位知道的战友提点一下，谢过了 。急啊！
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我都是配的1M的HEPES,过滤除菌后,1ml/EP管分装后放在4度保存,什么时候发现培养基变碱了,就加适量的HEPES,我加的是0.5ml/100ml培养基.还不错
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HEPES是的缓冲能力很强，一般是25克/瓶，可以在配制的时候就加进去，省得后加容易污染，常用的是3~5克/1000ml，这个自己可以在这个范围内酌情加，一般都能够达到缓冲作用，祝成功！
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-5-30 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
HEPES是起缓冲作用的
一定要先调PH值 再加HEPES
加完再调 和用HEPES调……
还真没试过
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-5-30 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用过，加ph -hepes：3g还不错。培养的细胞也不错
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-5-30 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在10%FBS血清培养液中,配置1000毫升时我习惯加3.57克,可以直接调PH为7.3到7.5
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发表于 2012-5-30 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Gibco的高糖培养基的缓冲能力真的是很差的！曾经咨询过Gibco的售后服务科学家，她也不能给出很好的解决办法！
对于这个问题我们曾经做过很多探索工作，发现加入HEPES可以在一定程度上改善培养基的缓冲能力！翻阅Gibco培养基的配方发现，一般的HEPES含量有10mM、15mM以及25mM 3个浓度！这三个浓度我都摸索过，发现对于高糖DMEM，效果都差不多。
所以，一方面从成本方面考虑，另外一方面从HEPES的毒性方面考虑，我建议你采用10mM的浓度比较好！
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-5-30 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、 Hepes（分子量238.3） 的使用浓度浓度一般为：10-50 mmol/L，也就是2.38g-11.9g/L. 我们实验室在每升DMEM内一般都加2.38-4.76g，缓冲效果不错。

2、很重要的一点是DMEM培养基在空气内暴露的时间不要过长，否则容易变碱。因为它的缓冲系统主要在含5%CO2的酸性条件下发挥作用，培养基暴露于空气后，其内的HCO3- 得不到CO2的缓冲，将导致培养基偏碱。建议用100ml小瓶分装，尽快用完。培养基用好后尽快封口。

以上请参考。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-5-30 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是这样做的：终浓度20mM
4.766gHEPES 溶于20ml的去离子水中，过滤除菌后，可以完全加入1L培养基中。
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-5-30 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室养平滑肌细胞，1L的DMEM加2G NAHCO3和2.7G HEPES，效果不错，大家可以尝试下啊
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