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标题:[求助]流式细胞术测血浆中微粒标本处理方法

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发表于 2012-5-31 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]流式细胞术测血浆中微粒标本处理方法


我想用流式细胞术测血浆中的内皮源性微粒，已购买荧光标记的抗体（PE ANTI -CD144),已文献证实这种微粒表面表达CD144，且具有特异性。但我们检测了两次均无特异性，不知道是否标本处理有问题。请不吝赐教，本人不胜感激！
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发表于 2012-5-31 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

EMP: CD31、CD42
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发表于 2012-5-31 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

抗体已经买了，我们还是想用CD144做，据说CD144特异标记内皮源性微粒（EMP).你们有过用CD31.CD42标记的经验吗？你的标本是怎麽处理的？对流式细胞技术上有什麽要求？
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发表于 2012-5-31 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

已经做了超过一千个样本，历时超过1年半，算是对EMP的流式检测有些经验吧。CD31和CD42的组合是肯定可以的。
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发表于 2012-5-31 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为EMP大小在1um左右，所以FS的消减滤片最好在检测时取掉，在此基础上还要将默认的检测触发信号（FS PEAK）阈值（discrimination）作相当大的下调（例如我的机器就是将默认100下调到25～35），否则有可能收不到多少信号。
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发表于 2012-5-31 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我测得也是临床样本。样本制备和染色我不管，是由临床那边的研究生完成，听说就是对离心的要求高一些，其它都很简单的，照文献方法就可以了。
流式检测环节来说，因为EMP比一般的细胞直径小了一个数量级，所以其散射光信号很弱，如果常规通过消减滤片并且采用默认触发信号阈值的话，可能很大部分（或者绝大部分）EMP过来的散射光都没有办法触发检测系统的获取过程，所以就没有信号了。
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发表于 2012-5-31 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非常感谢，我现在基本肯定可能问题在流式检测技术环节了。我想问一下你在武汉吗？如果在武汉我可以把标本送到你那里检测吗？
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 小中大
不在武汉。
其实EMP的检测一般的流式细胞仪都能完成，没有必要对仪器本身失去信心。关键是要跟操作员沟通好，你把我讲的跟他反馈一下，他应该能够理解和进行调整的，毕竟插拔一块滤片是易如反掌的事情，调整阈值参数就更加简单了。
就在你们自己单位做，没问题的。
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发表于 2012-5-31 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问问你们的操作员机器的型号，然后告诉我。
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发表于 2012-5-31 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天去找了操作员了，跟她讲了你的经验，她说消减滤片她们不会取。她们一般不会动机器上的部件。她答应再帮忙做一下。并说想看一下你们的图。不知道你可不可以帮忙。机器的型号我明天去问。再次感谢！
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