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标题:[求助]3T3-L1如何见建立胰岛素抵抗细胞模型

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]3T3-L1如何见建立胰岛素抵抗细胞模型




各位大侠，请问3T3-L1 诱导后如何建立胰岛素抵抗细胞模型？用什么具体方法，如何评价？我看文献上用3H－葡糖摄取实验，请问具体操作步骤如何？
请尽快指导，老板都催了几次了！真着急，真郁闷！
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于胰岛素抵抗模型，有动物模型，指的是胰岛素水平正常情况下，胰岛素功能水平下降。
用这个细胞所做的实验就是分为胰岛素刺激和不刺激两种状态下药物对细胞糖摄取的影响情况。如果药物能刺激细胞对糖的摄取，一般认为这个药物具有改善胰岛素抵抗的作用。
我们经常会理解有误区
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好：
我不太明白地一点是，我要做胰岛素刺激的细胞葡糖摄取，这样如何操作呢？而且，3H－葡糖摄取实验好像较为危险，放射性很强。还有其他方法吗？我是用造好模的细胞加药后，看对指标的影响！
期待您的指导！
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发表于 2012-5-31 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
老兄,3H-deoxyglucose是用来做己糖摄取试验的，不是用来诱导胰岛素抵抗的。
一般在细胞水平上做都是长时间（3-6小时）加入胰岛素之后再无血清处理半小时，然后再胰岛素处理5分钟或者15分钟，可以看见细胞的胰岛素抵抗现象，比如IRS-1 SER307的磷酸化等等。
当然加高糖也可以，但是不是很明显，学术界用的不多。
3H的放射性应该是所有放射性物质中最弱的，别担心，我们这里女孩子都不怕，呵呵。
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好 ：
我们实验室的老师不允许我们做放射性实验，你能不能告诉我造模具体操作步骤（3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型），你说的方法很简单，我看到的文献有用KRP缓冲液等等，能耐心的告诉我吗？因IR细胞模型完成后，要鉴定模型是否成功，所以需要测其葡糖摄取率，有别的方法测吗？又文献说用GOD-POD微量测量法，我就是不是很清楚。望多多交流！
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发表于 2012-5-31 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果不能做的话,很难在功能上确定细胞已经胰岛素抵抗了,在作GLUCOSE UPTAKE时,需要KRP或者是KRH BUFFER.
我没看见过文献报道有用测血清中GLUCOSE 的GOD-POD方法侧细胞的.
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，我看的文献是华西做的，用此方法做微量测定，好像还行，但不知可信否，那您知道，除此以外，有其他方法吗？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的细胞总是有分率并不太高，我觉得你可以重新试试，我们可以多交流！我其实也很郁闷，总是许多问题不好解决。你有什么困难，我们可以交流着共同解决！
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发表于 2012-5-31 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果想测定某种培养的细胞具有胰岛素抵抗，加入一定量胰岛素后细胞对糖的摄取应该小于不具有胰岛素抵抗的细胞。但不知加入的胰岛素量应该怎么确定？
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发表于 2012-5-31 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
国内是有文献用的GOD-POD方法来测定胰岛素抵抗模型细胞的葡萄糖摄取率来判断胰岛素抵抗的程度。根据他们的文献，也不是没有道理的。
但个人认为还是3H法更加可靠。并且国外没用在细胞上使用GOD-POD方法来鉴定模型建立成功与否的。因此，还是客服困难使用3H法，这个的放射性其实很小。

我关心的是。各位战友如何选用制造胰岛素抵抗细胞模型的方法。目前，方法有很多，比如 高糖、高胰岛素、高脂、TNF-a、地塞米松等，那么，是不是就是根据实验内容来选择呢，会不会存在所谓的“金方法”之说，有没有什么“权威”的方法，还是只要是通过3H方法鉴定存在胰岛素抵抗，就行。

请各位战友讨论下，选择制造细胞抵抗模型方法的注意事项和个人体会。谢谢。
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