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标题:[求助]关于悬浮细胞的共聚焦制片问题

雪山飞鹿[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于悬浮细胞的共聚焦制片问题


我的实验要用激光共聚焦显微镜测活细胞内的钙离子水平，看的文献都是做的贴壁细胞，我用的细胞是悬浮的，而且数量特别少（可以数的清），不知道在荧光染色（整个过程要避光）孵育后应如何洗涤。
很容易就把细胞都洗没了，请大家帮帮我~~~~~~！
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发表于 2012-5-31 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

整个过程要避光？ 没那么恐怖! 建议拿个锡铂纸包着离心管。
悬浮细胞一样能做，最后离心收集细胞，悬浮至一定浓度，置于截玻片上，再在其上加盖玻片应该能满足㸖的要求吧。
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发表于 2012-5-31 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加点甘油就可以了，一样做！
注意控制浓度！
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发表于 2012-5-31 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
整个过程要避光？ 没那么恐怖! 建议拿个锡铂纸包着离心管。
悬浮细胞一样能做，最后离心收集细胞，悬浮至一定浓度，置于截玻片上，再在其上加盖玻片应该能满足㸖的要求吧。

——————————————————————————————————————————————————————————————

如果用上述方法的话会有两个问题。
1、滴液和封片需要时间，所以加药后快速发生的钙离子浓度变化用上述方法检测不了
2、无法做长时间活细胞钙离子测量，缺少培养液的细胞状态会发生变化，测量的钙浓度非正常细胞的生理参数，这样的结果有意义吗？
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发表于 2012-5-31 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加点甘油就可以了，一样做！
注意控制浓度！

——————————————————————————

请教，甘油的作用是什么？是使细胞沉淀贴壁吗？
如何操作？
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好 我是制备脑组织的单悬液进行共聚焦测钙离子，不知你最近做的怎样？他们说的洗涤方法有试过么？ 我做出的结果不怎么好，多方找原因，希望能得到你反馈的消息
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发表于 2012-5-31 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

molecular cytomics出了一种专门给悬浮细胞用的slide
nunc可以买得到

cuturl('http://www.nuncbrand.com/page.aspx?id=11388&lang=en&')

可洗可confocal.

如果用一般的盖玻片压，一来形态可能会有变化，二来细胞需要一段时间才能稳定，不然就狂飘，spinning disk/split pinhole的速度稍微好点，一般的系统会有点吃力。
不容易哦。。。
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发表于 2012-5-31 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

poly-l-lys**可以么？最后几个字母记不清楚了。好像经过这个溶液处理的表面能吸附住细胞的。
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发表于 2012-5-31 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

拙见。不知道是否可以用Cytospin呢。钙离子没测过不知道，不过cytospin因该是将悬浮细胞贴在slide上的最常用的方法了，血液，造血类的试验经常用到。贴壁后可以HE，特殊，荧光染色观察，不过需要那一套器具和专用离心机。
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小糖块[使用道具]
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发表于 2012-5-31 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是贴壁细胞的，步骤就是爬片，最后就是用锡纸包的，因为须避光，结果还可以了
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