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标题:[求助]Gibco公司高糖DMEM培养基配制！

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-5-31 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]Gibco公司高糖DMEM培养基配制！



请高手赠Gibco公司高糖DMEM培养基配制方法。
我按照说明书配，加3.7克碳酸氢钠，和双抗但感觉配的不好，放-20度冰箱之后颜色就不是红的了，在解冻就发紫了。
谢谢！
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发表于 2012-5-31 14:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用的时候解冻了，放培养箱平衡试试看呢？
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yes4[使用道具]
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发表于 2012-5-31 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

gibco出的dmem，据我所知有两种，一种需要加入碳酸氢钠，另一种则需加碳酸氢钠和丙酮酸钠，不知道楼主注意看了没有。。。另外是否调了PH值？而且我的感觉，本来DMEM就有点发紫。。。。
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发表于 2012-5-31 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

比别人的红色要紫一点的，我没有调PH值，因为之前有人说看看颜色红红的就行了。
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发表于 2012-5-31 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

配培养基是要调ph值的，3.7克只能参考，加碳酸氢钠的过程中应该同时测ph值。
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-5-31 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们这边都用的高糖的DMEM.我们配制时是加的3.7g碳酸氢钠和3.0g的HEPES盐,后者对细胞无毒性作用,它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围.因为DMEM过滤后PH值会升高,所以我们将PH调到7.2.
我们这边配的用很久都是红色的,不会变紫.
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发表于 2012-5-31 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢你们，请问HEPES是这么配的啊？我也只听别人说过，但这边老师没让我用过。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-5-31 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问是不是边加边测PH就不用再用氢氧化钠和盐酸调了？
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-5-31 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用的是sigma的HEPES粉剂,配培养基时,等DMEM完全溶解后加3克HEPES粉剂到里面就行
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-5-31 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前段时间我遇到了因为培养基的偏碱而出现细胞培养不贴壁的问题，后来经过询问别的战友还有个人总结，认为DMEM高糖培养基的配制有一下几点要注意：
1、关于碳酸氢钠的量可以按照说明书上加3.7g也可以加按照经验加入1.5-2.0g,不过推荐使用1.5-2.0g（可见《细胞培养指南》书上所说的，1.9g左右适合于在5％CO2D的培养箱里培养）。
2、不管加多少碳酸氢钠，都需要调节PH值，因为过滤会是PH值升高，添加血清也会使培养基的PH值上升，所以一般把PH值调节在7.0-7.2之间，宁酸勿碱，因为细胞的抗酸能力要比抗碱能力强，如果你是在过滤前加入血清一起过滤的话，建议你加入血清也要调整PH值以后再过滤。
3、HEPES不是必须加入的，加入以后可以使得配制好的培养基PH值比较恒定。
4、关于培养基的颜色一般来说如果偏紫的话应该是PH值偏碱了，另外培养基的红色到底有多红和你是否加入血清还有加入血清的多少，以及是否加入HEPES都有关系，比如血清加多了红色会变淡而且偏黄。所以不能光看颜色来判断培养基的PH值，一定要用专门的PH仪来测量。
5、在调整PH值的时候一般大部分实验室的PH仪都需要避免磁场的干扰，所以不要用转子搅动的同时调整PH值。
以上只是本人目前总结出来一些小小的经验，希望能够对你有用！
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