小中大我认为问题不一定出在药物浓度上.说说我的实验吧,也许对你分析原因有帮助.
我做的是MIN6细胞.用6孔板,药物先稀释成各种浓度后给药,测上清中的分泌量,细胞的状态还很好.分泌量也用量依存式增加,
接下来用同样的浓度在96孔板上测LDH (与MTT大体同样的原理)时,结果时好时坏,用了很长时间找有关LDH的文献,没结果.
想,大概孔面积太小,移液枪头又太细,培养液小心贴壁注入,还是对细胞产生了伤害.换了6孔板加倍细心培养.就在今天加药后还是出现了小面积的凋亡.
分析 为什么同样的培养环境,同样的药物用量出现不同反应.
1,血清用量减少后细胞变弱(测MTT大概与血清用量无关).
2,一直在养这个细胞,传代次数过多,细胞变弱.
打算明天早起,解冻一管新的,试试看
对楼主的建议,分析一下问题是不是出在细胞上?培养环境,例如血清同一厂家不同批号都会对细胞有很大影响.
最后,每个人实验时都会遇到问题的,别灰心,加油吧
