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标题:[求助]做mtt时为什么细胞都死没了竟还染色最深?

911[使用道具]
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1
 

[求助]做mtt时为什么细胞都死没了竟还染色最深?



我又做的mtt,镜下观察确实是我想的那种结果,药物浓度大的细胞崩解死亡,药物浓度小的细胞凋亡的少,而没加药物的细胞长得还行,凋亡最少,我想这下可总算出结果了,谁知道加入DMSO后去测OD值,竟然是浓度最大的细胞基本上死没了的那组颜色最深,OD值最大,这是怎么回事啊?不是只有活细胞才能染色吗?难道细胞死亡或崩解也能染上颜色/?我都快郁闷死了……
哪位朋友可以帮帮我,解释一下这是怎么回事啊?
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utt0989[使用道具]
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不应该,最后一步振荡10分钟,使结晶充分溶解,再试吧.
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duoduo[使用道具]
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你的孔板中除了细胞外还有没有其他的东西?有没有出现很脏的情况?会不会有代谢物?或者染菌了?我前段时间也做过一次MTT,孔底后来出现了一层沙沙的东西,但培养基是澄清的,也不清楚是不是污染了,虽然细胞很少,但读数时就会出现很高的OD。
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KGZ564[使用道具]
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首先做重复试验,如果还是这样的情况,就有可能是你加入的药物是有还原性的,使得出现了假阳性的结果。
单就本次实验,可能性比较多,可能是你的板子不干净,或者不小心加入了其他的药品等等。
其实用MTT做这种实验,很容易出现药物有还原性带来的假阳性结果。所以MTT法并不是很可靠。
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911[使用道具]
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板子应该是没什么问题的,因为都是新板,一次性的,要说药物有还原性也不是没有可能,但是要有还原性也应该是所有加药的孔都有啊,不应该是只那么一排的吧?更不可能只死细胞多的那排吧?真是郁闷透顶了……
上面一位朋友说的出现一层沙沙的东西,还真是有那么点东西,就是细胞都死的那组,细胞像是崩解死亡了,染色后就出现染上色的一层,DMSO溶解后就颜色最深了,不知道该怎么解决?
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utt0989[使用道具]
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6
 

基本上推测 你的细胞所谓的崩解死亡飘起来那些东西是染菌了 有细菌污染的细胞 如果加入mtt后 就是那样的 嗯 不过啊 按道理说反应后加入dmso之前吸去上清 就不应该太深 可能污染物就在底层吧
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很有可能是 污染了
我也出现过这种i情况
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eric930[使用道具]
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染菌的可能性很大
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jujuba[使用道具]
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你好,这种情况我遇到过。
1 MTT实验以浓度为梯度,在一定的药物浓度范围内,一定的作用时间内表现为线性关系。你需要找的就是这个范围。
2 你的药物浓度太大了!如果你的药物效应在短时间内难以体现,你可以延长作用时间,可以调整细胞数,细胞状态来实现,不可以一味的加大浓度。
3 MTT有定量的优势,可以分辨到小数点后3位。但是,肉眼看见的A组比B组细胞数多,形态接近正常,但MTT可以显示B组值大于A组。
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911[使用道具]
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你好,这种情况我遇到过。
1 MTT实验以浓度为梯度,在一定的药物浓度范围内,一定的作用时间内表现为线性关系。你需要找的就是这个范围。
2 你的药物浓度太大了!如果你的药物效应在短时间内难以体现,你可以延长作用时间,可以调整细胞数,细胞状态来实现,不可以一味的加大浓度。
3 MTT有定量的优势,可以分辨到小数点后3位。但是,肉眼看见的A组比B组细胞数多,形态接近正常,但MTT可以显示B组值大于A组。

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我这个大浓度是为了筛选范围,因为没有可以参考的浓度梯度,所以先用的10倍的梯度,想先估计个大体的范围再细分……
可是要说是污染吗,有不像我以前种板污染的那种状态,污染的细胞很明显的,细胞漂了,液体混浊,而现在的那个是细胞还在底壁上,没有漂,液体也没有混浊呢……我看着也不像是污染……要说不是污染吧,但是当时的细胞数量没那么多,死亡后为什么会底壁上满满的呢&……不是单纯的单个细胞死亡……而是满满的不知道什么东西,不漂也不混浊,真是糊涂了……
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