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标题:[求助]细胞冻存的四个问题

skytree[使用道具]
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发表于 2012-6-2 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞冻存的四个问题



各位老师和师兄:
我是刚学细胞培养的,现在想进行细胞冻存.看了园子里各位高手关于细胞冻存方面的经验介绍,受益不浅.不过我还有几个问题向大家请教,希望各位老师和师兄不吝赐教!

1、细胞冻存保护液一般是DMSO：新鲜培养掖为1：9，但也有加血清的，或者加大血清比例的，我想问血清在冻存液中的作用是什么？
2、获取细胞后加冻存液，有的是先用培养液将细胞悬浮，再加冻存液；有的直接用冻存液悬浮。这两中做法那种好，有无理由？
3、冻存液需要4度预冷吗？如果预冷，那么细胞能经受38-4度的温度变换么？
4、有人说冻存过程中-20放置不需要，理由是-20~-30是形成冰晶的危险区域,细胞容易死。是这样的吗？
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-2 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 skytree 的帖子

1、我认为可以不加的吧，不过加了更好
2、冻存液体也含有基培的，应该可以
3、可以
4、负20到负60才是危险区
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发表于 2012-6-2 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.血清对细胞有保护作用吧。有时候无血清培养的细胞就是不加血清冻存。
2.应该是用冻存液悬浮比较好吧，如果后加DMSO，会出现放热，可能对细胞不太好。
3.冻存液预冷也是因为放热的缘故，所以配好后预冷一下。至于温差是否对细胞不利，个人觉得细胞都是比较坚强的，呵呵，除了比较娇气的细胞，同时，预冷后也可以等温度回升后再用。
4.我一般都放负20，有时放2-3小时，后复苏细胞没有问题，当然此时的温度 DMSO保护比较差。如果不放会不会更好，没有试过。
仅供参考阿！嗬嗬
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发表于 2012-6-2 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在也在冻存细胞，等过几天复苏下看看细胞活力。各种条件我都试过了，就看那种方法最好了。今天开始同时用程序性降温盒和普通的冻存方法对比试验，到时再看结果。不过，每种细胞的冻存方法都有差别的，到时复苏后我会上来汇报下结果。我也是菜鸟，道听途说了很多种方法，又不敢全信，干脆自己试试。我不是做细胞培养，我是分离单个核细胞后冻存，要求是复苏后细胞存活力越大越好。
白手起家ｉｎｇ，。。。
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发表于 2012-6-2 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要看具体是什么细胞了，我有一次曾经在4度放了两天，负20放了一天，结果复苏了还是不错的。
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2012-6-2 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、细胞冻存保护液一般是DMSO：新鲜培养掖为1：9，但也有加血清的，或者加大血清比例的，我想问血清在冻存液中的作用是什么？
血清在细胞的冷冻保存过程中起到保护细胞的作用。
2、获取细胞后加冻存液，有的是先用培养液将细胞悬浮，再加冻存液；有的直接用冻存液悬浮。这两中做法那种好，有无理由？
直接用配好的冻存液悬浮，能使细胞与冻存液充分混匀，减少细胞冻存过程时间，尽可能的降低了对细胞造成的损伤。
3、冻存液需要4度预冷吗？如果预冷，那么细胞能经受38-4度的温度变换么？
需要4度预冷！因为虽然DMSO在冷冻时对细胞有保护作用，但同时它对细胞也有毒害作用，经证明在4度时其对细胞的毒性最小，所以用DMSO所冷冻保护剂时，需要将其4度预冷，以减少对细胞的毒害作用，提高细胞存活率。
4、有人说冻存过程中-20放置不需要，理由是-20~-30是形成冰晶的危险区域,细胞容易死。是这样的吗
我不这样认为，本人也做过大量的细胞冻存，没用发现这种现象。冻存的细胞存活率还是很高的。
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skytree[使用道具]
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发表于 2012-6-2 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那么细胞悬液要不要预冷呢。加冻存液的时候要不要在冰上操作？如果细胞以后要作功能性测试，是不是每步都得无菌操作？
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发表于 2012-6-2 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果冻存一批细胞最好能在冰上操作，要是一两个的话，就没必要了，因为很短的时间就可以完成。要做功能实验的话，无菌操作很有必要
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